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发菜是一种原核蓝藻,生长环境恶劣,具有很强的抗逆性。盐胁迫下,发菜生长受到抑制,多糖分泌量增加,通过高通量转录组测序筛选出与盐胁迫相关的差异表达基因,通过PCR扩增、构建质粒,原核表达和功能研究,对这些基因进行深入的研究和分析,为发菜响应盐胁迫分子方面的研究提供数据。本研究通过分子手段克隆得到五个基因片段,分别是:TrkH钾吸收蛋白基因、TrkA-N钾通道蛋白基因、TrkA-N1钾通道蛋白基因、TrkA-N域蛋白基因以及DnaK分子蛋白基因。测序获得序列,通过生物信息分析,结果如下:TrkH钾吸收蛋白基因、TrkA-N钾通道蛋白基因、TrkA-N1钾通道蛋白基因、TrkA-N域蛋白基因及DnaK分子蛋白基因序列大小分别为 1335 bp、696 bp、1692 bp、678 bp、1905 bp,通过软件分析发现:核酸序列具有保守性。蛋白分子量大小分别为48.30 kDa、31.41 kDa、61.48 kDa、28.52 kDa、69.85 kDa,理论等电点分别为9.07、5.82、6.98、5.90、4.86。TrkH钾吸收蛋白的跨膜区个数为10个,TrkA-N1钾通道蛋白的跨膜区个数为2个,TrkA-N钾通道蛋白、TrkA-N域蛋白以及DnaK分子蛋白都不含跨膜区。5个蛋白全部为亲水性蛋白。TrkH钾吸收蛋白氨基酸序列中有17个Ser位点、15个Thr位点、2个Tyr位点,TrkA-N钾通道蛋白氨基酸序列中Ser、Thr以及Tyr的位点个数分别为:10个、6个和2个。TrkA-N1钾通道蛋白氨基酸序列中Ser、Thr以及Tyr的位点个数分别为:19个、12个和6个。TrkA-N域蛋白氨基酸序列中有11个Ser位点、6个Thr位点、2个Tyr位点,DnaK分子蛋白氨基酸序列中有29个Ser位点、22个Thr位点、3个Tyr位点。DnaK保护分子蛋白、TrkA-N钾通道蛋白、TrkA-N1钾通道蛋白、TrkA-N域蛋白的二级结构主要为α螺旋和折叠,DnaK保护分子蛋白的主要为α螺旋、随机卷曲以及折叠。TrkA-N钾通道蛋白、TrkA-N域蛋白和DnaK保护分子蛋白均成功表达,条带符合预期大小。表达条件为:当菌液OD600达到0.8时,加入IPTG诱导剂,继续摇床培养。培养条件:37℃,120rpm,诱导隔夜表达。TrkH钾吸收蛋白、TrkA-N1钾通道蛋白均未表达。研究为响应盐胁迫基因的构建和蛋白组学研究打下基础。