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非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是排除酒精或其他肝损伤因素外所致的以肝内脂肪沉积为主要特征的慢性肝脏疾病。除了脂质代谢紊乱和肝脏功能的损伤之外,NAFLD可诱发或伴发多种肝外损伤,其中以认知功能损伤和抑郁相关行为为主要表现的精神神经损伤尤为关注。新近研究表明,髓系细胞触发受体(Triggering receptor expressed on myeloid cells1/2,TREM1/2)参与了NAFLD的发病过程,有望可成为治疗NAFLD的潜在靶标。槲皮素(quercetin,QUE)是一种天然的多羟基黄酮化合物,具有包括抗衰老、抗炎、抗癌、治疗代谢综合征和神经保护作用在内的多种生物学活性。本研究通过高脂饮食诱导大鼠NAFLD模型,观察脂质代谢、肝脏形态和功能的改变,并通过行为学实验观察NAFLD大鼠的感觉、运动、情感及学习记忆能力,在此基础上探索性观察QUE的潜在治疗作用及可能机制。目的:通过高脂饮食诱导大鼠NAFLD模型,观察脂质代谢、肝脏形态和功能,以及神经精神行为的改变,探讨QUE的治疗作用及可能作用机制。方法:1.建立NAFLD大鼠模型,观察大鼠的糖脂代谢、肝脏形态和功能、神经精神行为变化18只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,随机分为对照组和模型组。模型组用60%高脂饲料喂养,对照组则给予标准对照饲料。每周称体重一次,造模4周后,进行行为学测试,包括旷场试验(open field test,OFT)、Morris水迷宫试验(morris water maze,MWM)、糖水偏爱试验(sucrose preference test,SPT)、强迫游泳试验(forced swimming test,FST),化学发光法检测血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、葡萄糖、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的水平,酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆nesfatin-1、瘦素、胰岛素和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)的水平,观察肝脏形态,计算肝湿重和肝指数,肝脏组织切片进行HE染色和油红O染色,脑组织切片进行HE染色和镀银染色,Western blotting方法观察海马和前额叶皮层中Copine6的蛋白表达。2.QUE对NAFLD大鼠的脂质代谢紊乱和神经精神损伤的治疗作用及机制研究雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、对照+QUE组(40mg/kg)、QUE组(80、40、20 mg/kg)、阳性药西格列汀组(10mg/kg)和多奈哌齐组(1mgkg)。每周称体重一次,连续给药4周后,进行行为学测试,包括OFT、MWM、SPT和FST,化学发光法观察血糖及血浆TC、TG和维生素D(Vitamin D,VD)浓度的变化,ELISA检测血浆皮质酮(Corticosterone,CORT)、TREM1和TREM2的含量,q RT-PCR检测下丘脑中促肾上腺激素释放激素(corticotrophin-releasing hormone,CRH)m RNA的含量,肝脏组织切片进行HE染色和油红O染色,脑组织切片进行HE染色和镀银染色,Western blotting方法检测大鼠海马和前额叶皮层中TREM1、TREM2、Synapsin-1(Syn-1)、Synaptotagmin-1(Syt-1)的表达。结果:1.与对照组相比,高脂饮食喂养的模型组大鼠表现出体重增高,血糖浓度及血浆血浆TC、TG、FFA、nesfatin-1浓度升高,血浆瘦素和胰岛素浓度降低,血浆葡萄糖浓度升高,肝脏湿重及肝指数增大、血浆ALT浓度升高及肝脏组织炎症细胞浸润和气球样变性;行为学结果表明模型组大鼠在MWM定位航行实验中逃生潜伏期延长、空间搜索实验中目标象限停留时间减少,同时在SPT中糖水偏爱指数降低,在FST中的不动时间延长,提示模型组大鼠存在学习记忆能力降低、快感缺失和行为绝望等精神神经行为异常,海马HE和镀银染色显示模型组大鼠海马部位炎症及神经元损伤性改变;Western blotting结果表明模型组大鼠海马中copine 6的蛋白表达降低。2.与NAFLD大鼠比较,QUE(80、40、20 mg/kg)ig给药对NAFLD大鼠体重和血糖变化无显著影响。但与模型组比较,QUE(80、40、20 mg/kg)ig给药组大鼠血浆TC、TG浓度下降。肝脏HE和油红O染色结果证实QUE可减轻NAFLD大鼠的肝脏脂肪样病变;行为学结果表明,QUE(80、40、20 mg/kg)ig给药可缩短NAFLD大鼠在MWM定位航行实验中的逃生潜伏期、延长其在空间搜索实验目标象限停留时间,并且增加其糖水偏爱指数、降低在FST中的不动时间。与模型组比较,QUE ig给药后大鼠血浆CORT浓度及下丘脑CRH m RNA表达显著下降,海马HE和镀银染色也证明QUE可以改善神经元损伤,Western blotting结果表明QUE ig给药后可以上调海马及前额叶皮层中Syn-1、Syt-1和TREM1的蛋白表达,下调TREM2的蛋白表达。结论:1.4周高脂饮食可成功诱导大鼠NAFLD模型,具体表现为肥胖、高糖高脂血症、肝脏形态和功能损伤,快感缺失、绝望及学习记忆能力减退;其机制可能与血浆nesfatin-1浓度上升及海马copine6的表达有关。2.QUE可改善NAFLD大鼠的脂质代谢紊乱、肝功能损伤及神经精神行为异常,其对神经精神行为的改善机制可能与改善脂质代谢、调节HPA轴活性、海马和前额叶皮层突触相关蛋白、TREM1和TREM2的蛋白表达有关。