慢性阻塞性肺疾病患者巨噬细胞吞噬功能的研究

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目的探讨慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者巨噬细胞的吞噬功能。方法2011年10月至2012年3月,收集COPD患者30例、健康体检者25例,抽取肘静脉血,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs),贴壁黏附法收集单核细胞,给予含粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)的培养液培养12d后,单核细胞分化为单核细胞源性巨噬细胞(Monocyte derived macrophage, MDM)。根据实验要求,MDM分为健康人组和COPD组,并分别给予萝卜硫素(Sulforaphane)干预,采用流式细胞术检测干预前后MDM吞噬FITC标记的大肠埃希氏菌(Escherichia coli, E. coli)荧光微粒(以下简称为FITC-E. coli)和pHrodoTM标记的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)荧光微粒(以下简称为pHrodoTM-S. aureus)的能力,同时通过菌落计数法计算并比较MDM吞噬E.coli后生成菌落的数量。结果(1)MDM吞噬FITC-E. coli和pHrodoTM-S. aureus的最佳浓度分别为0.04mg/m1和0.06mg/ml,最佳吞噬时间均为6h=(2)COPD患者MDM吞噬FITC-E.coli及pHrodoTM-S. aureus的荧光强度分别为153.39±18.34和155.04±22.67,健康人组MDM吞噬FITC-E.coli及pHrodoTM-5. aureus的荧光强度分别为225.37±23.50和223.43±28.18,COPD组MDM的吞噬能力较健康人组显著降低(F=17.75、15.70,均P<0.01)、(3)给予萝卜硫素干预后,COPD组MDM吞噬FITC-E. coli及pHrodoTM-S. aureus的荧光强度分别为180.46±7.88和186.25±3.63,较COPD组显著增加(F=17.75、15.70,均P<0.01)。给予萝卜硫素干预后,健康人组MDM其吞噬FITC-E. coli及pHrodoTM-S. aureus的荧光强度分别为227.24±22.62和241.00±23.69,较未干预健康人组无明显差异。(4)无论在COPD组还是健康人组,MDM在干预前后吞噬FITC-E.coli的能力与吞噬pHrodoTM-Saureus的能力比较,均无显著性差异。(5)COPD患者MDM吞噬E.coli生成菌落数(46.81±1.99)个,健康人组MDM吞噬E. coli生成菌落数(62.57±2.58)个,COPD组MDM的吞噬能力较健康人组显著降低(F=30.90,均P<0.01)。给予萝卜硫素干预后,COPD患者MDM吞噬E.coli生成菌落数(54.38±1.53)个较COPD未干预组显著增加(F=30.90,P<0.01)。而健康人组MDM给予萝卜硫素干预后,其吞噬E.coli生成菌落数(64.03±2.09)个较健康人未干预组无显著差异。结论COPD患者反复急性加重可能与巨噬细胞吞噬功能下降有关;萝卜硫素能提高COPD患者巨噬细胞的吞噬能力。
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