1．1中文摘要：河南贲门癌高发区贲门癌与癌前病变P15基因启动子区甲基化变化研究 贲门腺癌(Gastric cardia adenocarcinoma，GCA)是我国北方地区尤其是河南林州地区最常见的恶性肿瘤之一。GCA的显著流行病学特征是其与食管癌(Esophageal squamous cell carcinoma，SCC)地域分布的一致性。近二十年来世界各地特别是欧美一些国家胃远侧部位肿瘤发生率呈显著下降趋势，而胃与食管交界部腺癌的发病率呈明显上升趋势，其发病率以20％的增长率逐年升高，增加了近6倍，是所有恶性肿瘤中增长速度最快的一种，其原因尚不十分清楚。GCA与胃远侧部位肿瘤在流行病学、发病因素、病理学及临床特征等方面均存在较明显的不一致性。但其发生发展的分子机制尚不十分清楚。 目前普遍认为DNA异常甲基化改变是除缺失与突变之外导致抑癌基因表达失活的第三种机制，在肿瘤的发生发展中起着不可忽视的作用。抑癌基因的启动子区甲基化在转录水平抑制基因表达，其与许多恶性肿瘤关系的研究己见发表。P15基因是除P16基因之外另一种与肿瘤发生有密切关系的细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CDKI)，抑制细胞增殖，它的失活将有助于细胞的无限制生长，促进肿瘤的形成。许多研究发现P15基因启动子区甲基化改变与白血病、胃癌、肝癌、大肠癌、以及食管癌等多种恶性肿瘤有关，而这种甲基化改变与GCA关系的研究尚未见报道。我们实验室及其它合作者的研究结果表明P53—Rb系统的改变，包括P53的突变、Rb的等位缺失及P15、P14、P16的甲基化等在SCC癌变过程中起重要作用。我们假设在河南GCA与SCC高发区，GCA与SCC地域分布一致，它们可能具有相似的发病机制。本研究旨在通过检测河南GCA高发区GCA及癌前病变P15基因启动子区甲基化的变化特征和规律，以及与临床病理特征的关系，为进一步了解这种甲基化改变在GCA高易感性中的生物学意义打下基础。同时通过GCA与癌前病变甲基化变化的特征、规律与SCC的甲基化改变特点进行比较，为解释这一地区GCA与SCC同时高郑州大学医学院癌症研究室2004届硕士研究生毕业论文发是否具有相同致病因素提供分子线索。材料与方法: 研究对象为52例CCA及其相应癌旁组织均取自2003年4月一5月河南省林州市姚村食管癌医院GCA手术切除本，并观察了淋巴结受累情况。52例患者中男性43例，女性9例，男女之比为4.8:1，最大年龄为76岁，最小年龄为35岁，平均年龄59.83士8.61岁。52例CCA组织中低分化19例，中分化30例，高分化3例;52例癌旁组织病理类型中正常贪门上皮(NOR)9例，浅表性责门炎(C SG)17例，萎缩性责门炎(CAG)8例，不典型增生(DYS)18例。以上均经病理诊断证实，所有患者术前均未接受放疗和化疗。采用美国Gentra公司的试剂盒以盐析法提取基因组DNA，并采用美国Intergen公司CpGenomeTM DNA修饰试剂盒对组织DN人进行亚硫酸氢盐修饰，采用甲基化特异性pCR法(Mcthylation一specifie pCR，MSp)进行P15基因启动子区甲基化水平的检测。实验结果采用SPSS 10.0统计软件进行处理，各组间率的比较采用xZ检验、Fisher’s精确概率法及非参数秩和检验，检验显著性水准取Q=0.05，P<0.05有显著性意义。结果:1 52例CCA组织中P巧基因启动子区甲基化阳性率为30.8%(16/52)，其中4例(7 .7 %)为半甲基化;相应的癌旁组织中P15基因启动子区甲基化阳性率为7.6%(4/ 52)，其中2例(3.8%)为半甲基化。P15基因启动子区甲基化阳性率在癌组织(30.8 %)明显高于癌旁组织(7 .6%)，差异具有显著统计学意义，P<0.01。令人感兴 趣的是，有3例在GCA组织与癌旁组织中同时发现P15基因启动子区甲基化阳性， 线性组合统计分析与马克内马检验结合Pearson列联系数(P)= 0.2642得出，癌组织甲 基化与癌旁组织甲基化之间有关系，P<0.05。252例癌旁组织中有1例NOR为P15基因启动子区甲基化阳性，甲基化阳性率为1 .9%; 3例DYS甲基化扩增阳性，甲基化阳性率为5 .8%;而CSG与CAG两组均无甲基化扩 增。GCA组织甲基化率(30.8%)显著高于DYS(5 .8%)与NOR(l .9%)，差异具郑州大学医学院癌症研究室2004届硕士研究生毕业论文有显著的统计学意义，P<0.001。3男性患者中P15基因启动子区甲基化阳性率为27.9%(12/43)，女性患者中甲基化阳性率为30.8%(4/9)，男女两组间差异无统计学意义，P>0.05。4青年组、中年组、老年组患者中P15基因启动子区甲基化阳性率分别为6.3%、27.8 %、31，3%。各组间甲基化阳性率差异无统计学意义，P>0.05。516例P巧基因甲基化阳性患者中有淋巴结转移为12例(33.3%)，无淋巴结转移为4例(25%)。有淋巴结转移与无淋巴结转移两组间差异无统计学意义，P>0.05。6 52例CCA组织中高分化组、中分化组、低分化组P15基因启动子区甲基化阳性率分别为33.3%、333%、31.3%，各组间差异无统计学意义，P>0.05。716例P巧基因启动子区甲基化阳性的GCA患者中管状腺癌为13例，构成比为81.3%， 其它类型共3例，构成比为18.7%，其中乳头状腺癌1例，构成比6.2%，印戒细胞癌 2例，构成比12.6%。管状腺癌与其它类型癌两组间甲基化阳性构成比差异无统计 学意义，P>0.05。结论IP巧?