【摘 要】
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目的:随着分子生物学技术的发展,近年来,具有高敏感性的RT-PCR已经被用于实体瘤微转移的检测。甲胎蛋白和白蛋白mRNA是肝细胞癌微转移检测常见的标志物,但是正常肝细胞也可表
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目的:随着分子生物学技术的发展,近年来,具有高敏感性的RT-PCR已经被用于实体瘤微转移的检测。甲胎蛋白和白蛋白mRNA是肝细胞癌微转移检测常见的标志物,但是正常肝细胞也可表达甲胎蛋白和白蛋白mRNA,故对于其在微转移检测中的意义存在争议。另外,由于肿瘤细胞存在基因异质性,原发灶和转移灶的基因表达可能不一致,因此单标志物检测微转移容易出现假阴性。GPC3是近年来发现的一种具有肝癌细胞特异性的基因,在肝癌组织中表达率显著升高,在非癌组织及癌旁组织均不表达,在非肝癌组织基本无表达,该特性使其有可能成为一种新的理想的肝癌分子标记物。鉴于以上肝细胞癌微转移检测中存在的问题,以及GPC3的优越性,我们推测:采用GPC3和AFP多标志物联合检测可能有助于提高微转移检测的敏感性和特异性。 本研究在大鼠肝细胞癌模型中,通过联合检测外周血GPC3mRNA、AFPmRNA,以评价多标志物联合检测微转移的可行性,及AFPmRNA和GPC3mRNA在大鼠肝癌自然病程中的变化与肿瘤微转移的关系。为临床肝癌的早期检测奠定实验基础。 方法:研究对象分为实验组和正常对照组:采用二乙基亚硝胺建立大鼠肝癌模型,清洁级雄性Wistar大鼠120只,体重150±20g,实验组102只、对照组18只。经口咽插管灌喂2‰二乙基亚硝胺溶液,每天0.9ml,每周连续灌喂5d;第13周始每周连续灌喂3d,至第18周停止给药。对照组以等量生理盐水灌喂。从第10周开始在各个时相点宰杀大鼠,采用断颈放血,完整采集外周血10ml并肝素抗凝。按单个结节肝癌;2—5个结节肝癌;大于5个结节肝癌;有明显其它器官转移灶的肝癌对大鼠进行分组,对照组为正常大鼠。提取外周血总RNA,经逆转录后,用巢式PCR检测GPC3mRNA和AFPmRNA在外周血中的表达,分析二者表达与微转移发生的关系。 结果: 1.肝癌模型的建立 经0.2%二乙基亚硝胺诱导后获得75例成功构建的肝癌大鼠,诱癌率73.53%,其中25例单个结节肝癌;20例2—5个结节肝癌;18例大于5个结节肝癌;12例其它
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