[研究背景]： 假性肥大型进行性肌营养不良症(DuchennemusculardystrophyDMD/BMD)是源于横纹肌的一种X-连锁隐性致死性遗传病，进行性肌萎缩和腓肠肌无力伴小腿腓肠肌假性肥大是其典型的临床特征，男性活产婴儿的发病率为1/3500，DMD患者临床症状差异较大，可依据患者囚于轮椅年龄的迟早把本病分为三种临床亚型：DMD型、IMD型(intermediatemusculardystrophy)和BMD型(Becker’smusculardystrophy)。一般3～6岁发病，进行性加重，12岁左右即不能行走，约20岁夭折，本病由抗肌萎缩蛋白(Dystrophin)基因突变引起。抗萎缩蛋白基因是1986年哈佛大学DrKunkel通过定位克隆技术克隆，定位于Xp21，是目前发现的最大的人类基因，约占X染色体的2％，全基因组的0.05％，基因长约2600Kb，含79个外显子，内含子平均长约35Kb，内含子和外显子的碱基比约为200:1，DMDcDNA的长度为14Kb，，并且发现DMD基因突变是本病三种临床亚型患者发病共同的分子遗传学基础。 DMD基因由79个外显子和78个内含子组成，在组织中存在多种转录拼接类型，可编码多种氨基酸残基数目各异蛋白。DMD基因突变是本病的分子遗传学基础。据报道，约60％的基因突变为不同程度大片段缺失，5～10％为大片段重复，其余为常规方法难以检测的微小突变。基因突变主要由女性传给后代，但约有1/3为新突变。迄今尚无有效的治疗方法。富有前途的治疗方法有基因治疗和成肌细胞移植。其防治的基本措施是对DMD高危孕妇进行胎儿产前基因诊断，不让有病患儿出生。对此病进行深入研究是非常必要的。 [目的]： 建立一套准确、简便、可行的方案，对DMD家系进行基因诊断和产前诊断。 [方法]： 1.18对荧光引物多重PCR分析方法2.依赖探针连接的多重扩增技术(MLPA)3.短串联重复序列多态位点(STR)连锁分析方法4.HLA-ABDRSSP方法5.AmpFISTRldemifilerPCRAmplificationKit(ABI，美国)6.羊水细胞培养7.采用SPSS11.5软件进行统计[结果]： 我们把18对荧光引物多重PCR分析方法、依赖探针连接的多重扩增技术(MLPA)和短串联重复序列多态位点(STR)连锁分析方法有机结合，完成了425个家系的基因诊断，联合Identifiler试剂盒和羊水细胞培养技术对52个孕妇进行基因产前诊断。 1.同时用18对荧光引物多重PCR分析方法和依赖探针连接的多重扩增技术(MLPA)对80例患者和其母亲进行检测。MLPA结果：检出率为69％，58％(46/80)患者为DMD基因缺失，其中41％(19/46)DMD基因缺失患者的母亲为携带者；11％(9/80)患者为DMD基因重复，100％(9/9)DMD基因重复患者的母亲都为携带者。6名患者(4名为基因缺失，2名为基因重复)是多重PCR方法漏检的，MLPA技术可增加8％(6/80)检出率。 2.采用依赖探针连接的多重扩增技术(MLPA)对425名DMD患者和其母亲进行检测，248个病例为缺失突变，占58.4％；44例为重复突变，占10.4％；其中新突变有109例，占37.2％。 3.52个做产前诊断家庭中，先证者为缺失突变31例，为重复突变9例，为非缺失和重复突变12例。 4.53例羊水标本经Identifiler试剂盒检测，其中男性胎儿35例，女性胎儿18例；其中3份污染了母血，经羊水培养后，再检测均无污染；DMD基因分析：用MLPA方法分析41例，用STR连锁分析6例。35例男胎中，9例为患胎，行引产术，其中2例只做性别的男胎行引产术，26例男胎诊断为正常继续妊娠。18例女胎中8例正常，4例携带者，其中4例只做性别检测。经产前诊断出生的小孩已都进行血清酶学检查作为产后追踪，结果并没发现异常。 5.6例羊水DMD基因检测正常标本采用HLA-ABDRSSP方法与先证者进行比对，其中一例人类白细胞抗原(HLA)全相合，建议分娩时保存脐带血。 [结论]： 1、依赖探针连接的多重扩增技术(MLPA)可同时检测79个外显子缺失和重复型突变的纯合子和杂合子，灵敏度高，结果准确可靠，是比荧光多重PCR技术更为高通量的DMD基因诊断技术，是目前DMD基因诊断中诊断效率最高的一种方法。 2、通过把依赖探针连接的多重扩增技术(MLPA)，短串联重复序列多态位点(STR)连锁分析，AmpFISTRIdentifiIerPCRAmplification，HLA-ABDRSSP和羊水培养方法有机结合，可以有效地应用于DMD的临床产前诊断中。这种组合适用于大多数DMD女携带者，可以在鉴别男胎的同时分辨携带者和非携带者女胎，也可降低因基因重组引起的误诊风险及有效检测外源性DNA污染。同时，对胎儿进行HLA检测有利于开展对DMD的治疗研究。