【摘 要】
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目的:LCMR1是从具有高转移能力的肺癌细胞中分离出来的与肺癌的发生和转移密切相关的蛋白,但其参与肺癌发生发展的具体机制尚未阐明。自噬作为高度保守的细胞代谢过程,能够帮助肿瘤细胞在饥饿等不利环境下存活,从而促进肿瘤的发生和发展。本研究拟从检验LCMR1对肺癌自噬的影响方面探讨自噬是否可能为LCMR1参与肺癌发生发展的机制之一。方法:（1）用慢病毒载体感染的RNA沉默法在A549细胞系和H1299细
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目的:LCMR1是从具有高转移能力的肺癌细胞中分离出来的与肺癌的发生和转移密切相关的蛋白,但其参与肺癌发生发展的具体机制尚未阐明。自噬作为高度保守的细胞代谢过程,能够帮助肿瘤细胞在饥饿等不利环境下存活,从而促进肿瘤的发生和发展。本研究拟从检验LCMR1对肺癌自噬的影响方面探讨自噬是否可能为LCMR1参与肺癌发生发展的机制之一。方法:（1）用慢病毒载体感染的RNA沉默法在A549细胞系和H1299细胞系建立LCMR1敲减的稳定转染肺腺癌细胞系。（2）通过CCK-8法、平板克隆形成实验及细胞周期检测检验LCMR1对细胞的增殖的影响,使用划痕实验检测LCMR1对细胞的迁移能力的影响,使用流式细胞仪检测LCMR1对细胞凋亡的影响。（3）分别使用RT-qPCR法和Western blot法检测自噬指标LC3、SQSTM1/p62及自噬相关蛋白ATG5、ATG13和BECN1的mRNA和蛋白表达,观察LCMR1对肺癌细胞自噬的影响。（4）使用Western blot法检测LCMR1对自噬调控分子PI3K-mTOR信号转导途径及p53的影响。结果:（1）使用慢病毒载体包裹LCMR1 shRNA感染肺癌细胞可使细胞中LCMR1的mRNA及蛋白水平表达下降。（2）相较于对照组和未感染组,A549细胞和H1299细胞中LCMR1敲减组细胞生长曲线落后,克隆形成率减低、细胞周期中处于GO/G1期的细胞增多,处于S期的细胞减少。LCMR1敲减对A549细胞和H1299细胞的细胞迁移率及凋亡细胞比例无明显影响。（3）A549细胞中LCMR1敲减组的ATG5、ATG13、LC3与SQSTM1/p62的mRNA及蛋白表达水平显著低于对照组及未感染组,BECN1的蛋白表达水平则无明显差异。在H1299细胞,LC3、SQSTM1/p62、ATG5、ATG13 及 BECN1 的 mRNA 表达水平均低于对照组,而在蛋白水平,仅SQSTM1/p62的表达低于对照组,ATG5、ATG13、BECN1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达均与对照组及未感染组无差异。（4）在A549细胞中,LCMR1敲减组Ⅰ类PI3K的蛋白表达总量以及磷酸化mTOR/mTOR的比值低于对照组及未感染组,而H1299细胞中三组间PI3K蛋白表达与及磷酸化mTOR/mTOR的比值无统计学差异。（5）A549细胞中,LCMR1敲减组p53的mRNA表达水平及细胞核中的p53蛋白表达水平较对照组及未感染组明显减少。结论:（1）使用慢病毒包被的LCMR1 shRNA感染A549细胞和H1299细胞,经过嘌呤霉素筛选,可以成功构建LCMR1敲减稳定转染细胞系。（2）LCMR1敲减抑制A549细胞和H1299细胞的群体生长能力和单体增殖能力,使两者处于G0/G1期的细胞增多,处于S期的细胞减少,发生GO/G1期阻滞。（3）LCMR1敲减不影响A549细胞和H1299细胞的迁移和凋亡。（4）LCMR1敲减显著抑制A549 细胞的 ATG5、ATG13 与 SQSTM1/p62 的 mRNA 和蛋白表达,使 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值减低,自噬基础水平减低。推测LCMR1抑制A549细胞自噬的起始阶段,而不影响自噬体与溶酶体的结合。（5）LCMR1敲减未影响H1299细胞的基础自噬水平和自噬相关蛋白ATG5、ATG13及BECN1的表达。（6）LCMR1敲减减低A549细胞系的自噬水平可反射性抑制PI3K-mTOR通路的活性。（7）LCMR1敲减使细胞核中p53蛋白的表达减少,p53介导的自噬途径可能是LCMR1参与肺腺癌的发生和发展的机制之一。
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