【摘 要】
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从成都皮革厂等经常堆集皮毛的场所采集土样,通过以明胶为主要基质进行富集和初筛,再以Ⅲ型胶原为底物测定发酵培养液中胶原酶活力为复筛的筛选模型,经反复分离筛选,得到一株胶原
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从成都皮革厂等经常堆集皮毛的场所采集土样,通过以明胶为主要基质进行富集和初筛,再以Ⅲ型胶原为底物测定发酵培养液中胶原酶活力为复筛的筛选模型,经反复分离筛选,得到一株胶原酶产生菌。经形态观察、生理生化实验及美国BIOLOG微生物鉴定仪,鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌J-4-8(Bacillus licheniformis)。 通过单因素分析和正交实验的进一步研究,得出该菌产酶的最适碳源为蔗糖,氮源为明胶,起始pH7.5,100ml三角瓶的容瓶装量为10ml,种龄24h,接种量6%,其优化发酵培养基组成为:蔗糖5%,明胶1.2%,酵母膏0.1%,MgSO4.7H2O 0.08%,CaCl2 0.02%,K2HPO4.3H2O 0.1%。在通气量为1:0.5~1:1,转速450rpm,2L的发酵罐中,37℃下发酵24h后,其胶原酶的产量为31U/ml,较起始发酵条件下的酶活提高了72.2%。 将J-4-8的发酵液浓缩得胶原酶的粗酶,测得该酶的最适反应温度为41℃,最适反应pH为7.5,4℃时在pH7-10内酶活稳定,30℃时在pH7-9内酶活稳定,具有较高的热稳定性,Ca2+促进酶活,EDTA、Cu2+、Zn2+、Pb2+、Ba2+、Fe2+均在一定程度上抑制酶活,PMSF或Mg2+对酶活影响不大,是一种金属蛋白酶。
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