MiR-155影响EAE小鼠脾组织Th1/Th2细胞亚群从而改变EAE的病程

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目的:研究miR-155在体内过表达和抑制对由髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)小鼠脾组织中Th1、Th2细胞的比例及相关炎性因子表达水平的影响,初步探讨miR-155对EAE小鼠的免疫系统的影响及可能的作用机制,为多发性硬化的可能发病机制和诊断治疗方法提供有意义的基础实验依据。方法:取8-10周龄、体重18-20克的雌性C57BL/6小鼠,随机分为四组:miR-155类似物组、miR-155抑制剂组、miR-155类似物对照组及miR-155抑制剂对照组。利用MOG为抗原免疫小鼠以建立EAE动物模型。于免疫后第5天、第7天、第9天、第11天各组分别尾静脉注射miR-155类似物、miR-155抑制剂、miR-155类似物对照物、miR-155抑制剂对照物,并且每日两次观察小鼠的体重变化、发病情况和临床神经功能评分。于免疫后20天(发病高峰期)处死小鼠,无菌条件下取出小鼠的脾研磨成单细胞悬液。流式细胞学方法测定小鼠脾组织中Th1、Th2细胞的比例变化;酶联免疫吸附测定法检测小鼠脾单细胞悬液上清液中IL-4、IL-10和IFN-γ的表达情况;PT-PCR方法检测脾细胞中IL-4mRNA,IL-10mRNA及IFN-γ mRNA表达水平。结果:1各组小鼠临床表现观察:miR-155类似物组与miR-155类似物对照组相比,其发病率、发病时间、体重减轻程度及发病高峰期的神经功能评分均明显增高(P<0.05);miR-155抑制剂组与miR-155抑制剂对照组相比,其发病率、发病时间、体重减轻程度及发病高峰期的神经功能评分均明显降低(P<0.05)。2各组小鼠脾组织中Th1、Th2细胞的比例变化:于发病高峰期各组小鼠脾组织中Th1、Th2细胞比例有明显差别,miR-155类似物组与miR-155类似物对照组相比,小鼠脾组织中Th1细胞比例明显增高,Th2细胞比例明显降低(P<0.05);miR-155抑制剂组与miR-155抑制剂对照组相比,小鼠脾组织中Th1细胞比例明显降低,Th2细胞比例明显增高(P<0.05)。3各组小鼠脾细胞上清液中IL-4、IL-10及IFN-γ的表达情况:于发病高峰期各组小鼠脾细胞上清液中IL-4、IL-10及IFN-γ的浓度有明显差别,miR-155类似物组与miR-155类似物对照组相比,小鼠脾细胞悬液上清液中IL-4及IL-10浓度明显降低,IFN-γ浓度明显升高(P<0.05);miR-155抑制剂组与miR-155抑制剂对照组相比,小鼠脾细胞悬液上清液中IL-4及IL-10浓度明显升高,IFN-γ浓度明显降低(P<0.05)。4各组小鼠脾细胞中IL-4mRNA、IL-10mRNA及IFN-γ mRNA表达水平:于发病高峰期各组小鼠脾细胞中IL-4mRNA、IL-10mRNA及IFN-γmRNA的含量有明显差别,miR-155类似物组与miR-155类似物对照组相比,小鼠脾细胞中IL-4mRNA及IL-10mRNA含量明显降低,IFN-γmRNA含量明显升高(P<0.05);miR-155抑制剂组与miR-155抑制剂对照组相比,小鼠脾细胞中IL-4mRNA及IL-10mRNA含量明显升高,IFN-γ mRNA含量明显降低(P<0.05)。结论:1miR-155过表达或抑制影响EAE小鼠的发病率、发病时间、神经功能缺损程度。2miR-155过表达能够通过增加IFN-γ的表达、减少IL-4及IL-10的生成及改变Th1/Th2细胞亚群等方面影响EAE小鼠的免疫调节作用,增强炎症反应进而加重其病情,miR-155抑制表达则可通过免疫调节作用减轻炎症反应缓解病情。
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