改进型免疫侧向层析三聚氰胺检测方法研究

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三聚氰胺是含氮量极高的工业化学原料,在食品中非法添加长期误食会对泌尿系统造成损害,因此针对三聚氰胺建立快速、灵敏、便捷的新型检测方案对维护人类健康和食品安全具有很重要的意义。本文介绍了以下两种快速检测方法:(1)三聚氰胺传统型免疫层析检测技术建立本方法基于经典的抗原抗体免疫识别方法和竞争法检测原理进行三聚氰胺的识别检测,在金纳米粒子表面标记组装三聚氰胺抗体,T线固定三聚氰胺抗原,C线固定羊抗鼠二抗,肉眼通过观察T/C线是否显现定性分析三聚氰胺的存在状况,结合扫描线条的显色强度进行三聚氰胺定量分析。实验中优化了金纳米粒子粒径、NC膜类型和样品垫缓冲液等关键参数,最佳实验条件下,9分钟完成检测,肉眼观测灵敏度为100 ppb,在检测范围0-200 ppb能够建立线性良好的标准曲线(R~2=0.9888),本方法具有卓越的识别特异性,牛奶复杂样品检测应用结果和标准品检测结果高度一致。(2)三聚氰胺增敏型免疫层析检测技术建立本研究在传统的基于竞争法层析试纸条的基础上进行改进,增加一个BSA抗体与金纳米粒子制备的增敏元件构建增敏型试纸条,将传统型试纸条的灵敏度大大提高。本增敏型三聚氰胺检测试纸条研究中,主要优化了增敏金的粒径,增敏元件上抗体的量和标记pH值。在识别垫采用25 nm金纳米粒子,增强垫采用15 nm金纳米粒子,并采用赛多利斯CN95膜,可在9分钟内实现三聚氰胺的超灵敏快速检测,肉眼检测灵敏度为5 ppb,相比于传统型方法灵敏度提升了20倍,标准曲线检测线性范围为:0.1-5 ppb(R~2=0.9861),检测实际牛奶样品的结果与标准品测试一致,在环境监测和食品安全等领域的具有巨大的应用潜力。
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