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目的利用两亲性聚合物PEG-PCL60为载体,制备包载17AAG和cypate的17AAG-cypate聚合物胶束,探索其增强非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的作用机制。方法(1)17AAG-cypate聚合物胶束的制备以及表征:用溶剂透析法和有机溶剂挥发法联合的方式制备了 1 7AAG-cypate聚合物胶束,利用透射电镜和纳米粒度及zeta电位分析仪等对聚合物胶束进行表征。(2)在激光和X射线照射下,17AAG-cypate聚合物胶束的体内抗肿瘤活性:建立A549细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过治疗期间移植瘤体积的大小变化情况和HE染色评价治疗效果;通过裸鼠体重变化情况和血常规以及血生化指标评价聚合物胶束的生物安全性;采用免疫组织化学实验检测移植瘤组织Ki67、CD31表达分析其对移植瘤组织增殖能力、微血管密度的影响;采用TUNEL法和Western blot法分析其对移植瘤组织凋亡的影响。(3)在激光和X射线照射下,17AAG-cypate聚合物胶束的体外抗肿瘤作用机制:用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,用细胞衰老p-半乳糖苷酶染色实验检测细胞衰老,用细胞免疫荧光法检测细胞DNA双链断裂与修复情况以及用Western blot实验探究其相关蛋白的变化。结果1.制备了包载17AAG和cypate的17AAG-cypate聚合物胶束,透射电镜下显示胶束外观周边圆整呈球状,纳米粒度及zeta电位分析仪显示胶束平均粒径为(73.7±0.07nm),zeta 电位为(-7.70±1.22)mV,多分散指数(PDI)为 0.234,胶束的分散比较均匀。2.体内结果显示:(1)裸鼠移植瘤模型实验表明17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射治疗明显抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长,而且可以增强肺腺癌裸鼠移植瘤的放射敏感性。(2)血常规和血生化检测结果未发现17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射治疗对裸鼠的造血系统、肝肾功能的毒性作用,同时治疗期间裸鼠的体重未发生明显的变化。(3)免疫组织化学实验结果显示17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射治疗可以减少移植瘤组织Ki67和CD31蛋白的表达。(4)TUNEL法和免疫组织化学实验结果显示17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射能够显著提高移植瘤组织中TUNEL 阳性细胞数,升高凋亡相关蛋白cleaved-caspase3的表达水平;Western blot结果显示移植瘤组织PARP总蛋白表达下降,活化的PARP和caspase3表达增加,凋亡抑制蛋白BCL2的表达下降。3.体外结果显示:(1)流式细胞仪检测结果显示17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射能够明显增加A549细胞的G2/M期阻滞和细胞凋亡现象。(2)β-半乳糖苷酶染色实验结果发现17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射可以明显增加A549细胞衰老的比例。(3)免疫荧光实验结果发现17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射可以明显增加细胞DNA双链断裂形成数量,但抑制DNA损伤的修复效率。结论在体内实验中,17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射通过影响移植瘤组织的增殖能力、细胞凋亡、血管生成增强肺腺癌裸鼠移植瘤的放射敏感性;在体外实验中,17AAG-cypate胶束联合X射线与激光照射通过诱导细胞凋亡、引发细胞衰老、延长G2/M期阻滞、增加DNA双链断裂数量、降低损伤修复能力提高A549细胞的放射敏感性。