【摘 要】
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目的:构建人骨髓间充质干细胞（human Bone derived mesenchymal stem cells,h BMSCs）与子宫内膜癌JEC细胞共培养体系,探究h BMSCs对JEC细胞增值、迁移、凋亡的影响。利用高通量测序、生物信息学方法分析并筛选共培养前后表达存在差异的mi RNA及m RNA,预测其中可能存在的靶向关系并加以验证。方法:单独培养h BMSCs和JEC细胞。用慢病毒Le
【基金项目】
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项目名称:肿瘤微环境的间充质干细胞通过 PI3K/AKT-mTOR 通路调控自噬影响子宫内膜癌发生发展的机制研究，项目合同编号:02402219022，项目来源:广西壮族自治区教育厅，项目起止时间:2019.07-2021.06；
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目的:构建人骨髓间充质干细胞（human Bone derived mesenchymal stem cells,h BMSCs）与子宫内膜癌JEC细胞共培养体系,探究h BMSCs对JEC细胞增值、迁移、凋亡的影响。利用高通量测序、生物信息学方法分析并筛选共培养前后表达存在差异的mi RNA及m RNA,预测其中可能存在的靶向关系并加以验证。方法:单独培养h BMSCs和JEC细胞。用慢病毒Lenti-GFP对JEC细胞进行感染,杀稻瘟菌素（blasticidin,BSD）对感染阳性的细胞进行筛选。将感染阳性的JEC细胞记为JEC-GFP细胞。实验分为两组:JEC-GFP组为JEC-GFP细胞单独培养;JEC-GFP-BM组为JEC-GFP细胞与h BMSCs按1:3比例混合进行共培养;每组均设立三个重复组。共培养三天后,用差速消化分离共培养后JEC-GFP细胞,CCK8实验、Transwell细胞迁移实验、细胞凋亡实验分别验证h BMSCs对JEC细胞增殖、迁移、凋亡的影响。用流式细胞分选仪分选两组细胞,进行高通量测序,用生物信息学方法筛选出共培养前后差异表达的mi RNA和m RNA分子并分析,对预测到的靶向关系进行双荧光素酶实验验证,并用q PCR及WB验证其表达量。结果:（1）h BMSCs可抑制JEC细胞增殖、迁移,促进其凋亡（P＜0.05）。（2）经过分析筛选出有意义的差异mi RNA 397个及差异m RNA 7289个,其中JEC-BM组较JEC组表达上调有mi RNA 151个、m RNA 4177个,下调mi RNA 246个、m RNA 3112个。（3）通过靶基因预测数据库预测到mi RNA mi R-125a-5p与m RNA ETS1可能存在靶向关系;与JEC组相比,JEC-BM组mi R-125a-5p表达量下调,ETS1表达量上调。（3）q PCR及WB验证mi R-125a-5p、ETS1表达情况,变化趋势与测序一致。（4）双荧光素酶报告实验得出mi R-125a-5p与ETS1存在靶向关系,mi R-125a-5p对ETS1的表达具有负向调控的作用。结论:成功构建h BMSCs与JEC细胞共培养体系。通过高通量测序技术发现JEC细胞与h BMSCs共培养后存在大量差异表达的RNA。预测并验证mi R-125a-5p与ETS1存在靶向关系,为下一步开展子宫内膜癌相关mi RNA及m RNA的研究提供实验基础。
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