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目的PIWI是一种重要的胞浆蛋白,在精子发生、RNA干扰和翻译调控中发挥了重要作用。现已证实,人PIWI家族多个成员与肿瘤的发生发展可能相关,可能具有癌基因的活性。而本实验室也在前期研究中发现,PIWIL4在在卵巢癌组织中的表达明显上调,通过RNA干扰方式抑制PIWIL4功能后,有效抑制了人卵巢透明细胞癌ES-2细胞的生长活性和增殖能力。目前还未见其在宫颈癌中的相关研究。本课题将首先检测PIWIL4基因在宫颈癌组织中的表达水平,并进一步研究PIWIL4对宫颈鳞状上皮细胞癌HeLa细胞生长表型的影响,并初步探讨PIWIL4对HeLa细胞生长影响的机制,以探寻PIWIL4对宫颈鳞状上皮细胞癌特性的影响及作用机制。方法首先通过实时定量PCR技术,检测PIWIL4基因在宫颈癌组织和正常组织中表达水平的差异。进而在人宫颈鳞状上皮细胞癌细胞系HeLa细胞中,分别通过构建过表达载体和RNA干扰技术,过表达和抑制内源性PIWIL4的功能,利用MTT实验、平板克隆形成实验和生长曲线分析检测HeLa细胞增殖活性的变化。而后通过TUNEL技术检测在血清饥饿条件下,PIWIL4对HeLa细胞凋亡率的影响,并进而采用western blot技术检测PIWIL4对凋亡相关酶类caspase-8和caspase-9在蛋白水平的影响。结果通过对9对宫颈癌组织和正常癌旁组织中PIWIL4的表达情况分析发现,PIWIL4mRNA在77.8%(7/9)宫颈癌组表达较正常对照组高。在人类宫颈鳞癌HeLa细胞中,过表达PIWIL4后,细胞生长明显增强,而且克隆形成能力明显提高；而以RNA干扰技术(pSilencer2.1/PIWIL4-shRNA)封闭PIWIL4后,则细胞生长活性下降,集落形成能力也有所降低。TUNEL技术检测血清饥饿条件下,过表达PIWIL4组的细胞凋亡率较对照组有所降低,caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平也是下降的；而封闭PIWIL4细胞组的凋亡率较对照组是升高的,caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平也是增加的。推测在宫颈鳞癌HeLa细胞系中,PIWIL4通过抑制细胞凋亡而发挥了癌基因的活性。结论PIWIL4基因在人宫颈癌组织中的表达水平较正常组织高,PIWIL4能够促进HeLa细胞的生长活性和增殖能力,并能抑制其凋亡。通过研究PIWIL4在人宫颈鳞癌HeLa细胞系中的作用机制,为PIWIL4作为宫颈癌早期诊断和治疗的靶点提供了新的线索。