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目的:本研究通过剪断舌下神经来制作小鼠神经损伤动物模型。观察在小鼠舌下神经损伤后不同时间段舌下神经核内神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞的数量及形态变化,探讨神经元丢失与神经胶质细胞变化之间的关系。
方法:实验动物为成年昆明小鼠30只,雌雄不限,体重30±5g,将其随机分为2组,每组15只。腹腔注射4%水合氯醛麻醉下,暴露左侧舌下神经,剪断后缝合皮肤。分别于术后第7天和第35天乙醚深麻醉下开胸,心脏灌流,取脑,于4%甲醛溶液中后固定过夜。20%DEPC蔗糖水内置换过夜后,OCT冷冻包埋液包埋,选取延髓舌下神经核部位冰冻连续切片,片厚18μm,用于免疫组织化学染色及硫堇染色。观察舌下神经损伤后在不同时间段损伤侧舌下神经核内神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞数量及形态的变化。所有数据用SPSS11.5软件进行分析处理。
结果:在舌下神经损伤第7天,损伤侧舌下神经核内神经元出现胞体肿胀、核偏移、尼氏体边聚,但其数量(8.00±1.35个/14400μ㎡)与非损伤侧(8.51±1.30个/14400μ㎡)相比无显著性变化(P>0.05);在损伤第35天,损伤侧舌下神经核内神经元形态接近正常,其数量(6.70±1.22个/14400μ㎡)与非损伤侧相比(8.41±0.61个/14400μ㎡)显著减少(P<0.05)。损伤侧星形胶质细胞染色加深、突起增多、变粗、变长、胞体肥大,损伤第7天损伤侧舌下神经核内星形胶质细胞数目(6.67±0.73个/14400μ㎡)与非损伤侧(5.33±0.62个/14400μ㎡)比较虽然略有增多,但不具备显著性差异(P>0.05);而在损伤第35天,损伤侧舌下神经核内星形胶质细胞数目(7.85±0.42个/14400μ㎡)显著高于非损伤侧(5.41±0.33个/14400μ㎡,P<0.05)。小胶质细胞在舌下神经损伤第7天胞核增大、突起变短,紧密地围绕在神经元周围,数目(9.59±0.80个/14400μ㎡)比非损伤侧(2.52±1.17个/14400μ㎡)显著增多(P<0.05);在损伤第35天,损伤侧舌下神经核内小胶质细胞的数目(5.40±0.95个/14400μ㎡)与非损伤侧数目(2.18±0.28个/14400μ㎡)相比仍显著增多(P<0.05),但是从形态上越来越接近于静止状态的小胶质细胞,并远离神经元。
结论:
1.切断成年小鼠舌下神经第35天出现舌下神经核内神经元丢失。
2.伴随神经元的丢失过程,神经胶质细胞处于不同的活化状态,这种改变可能与神经元丢失机制相关。