TRPV4在肝脏肿瘤中的表达及其与肝癌发展关系的研究

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目的:在我国原发性肝癌是一种常见的恶性程度较高的肿瘤,其高发病率和低生存率的特点严重危害了我国人民的生命财产安全。因此通过探索原发性肝癌发生发展的机理,从中选择关键位点可能为今后的治疗提供选择。本实验旨在通过分析TRPV4通道蛋白在肝脏常见的良恶性疾病中的表达情况,研究其不同程度的表达对肝癌细胞肿瘤学特性的影响,揭示其在肝细胞癌发展中可能存在的作用。方法:1、收集自2012年8月至2017年8月于山西医科大学第一医院因各种疾病行肝脏手术的病理标本及临床资料。通过免疫组化方法研究TRPV4在肝脏常见的良恶性疾病中的表达情况,并分析其表达情况与对应患者病例资料间的关系。2、在肝癌Huh-7、HepG-2细胞株中进一步检测TRPV4基因及蛋白表达情况并与正常人肝细胞LO2细胞株中对比;在肝癌细胞株细胞株中利用小干扰RNA(si-TRPV4)转染及非选择性阻滞剂钌红阻滞等技术调控、消耗蛋白的表达,进一步检测低蛋白表达的肝癌细胞株其增殖、侵袭迁移等方面的变化,并与未处理肝癌细胞株对比。结果:1、免疫组化显示TRPV4在肝血管瘤与肝硬化的表达差异(c~2=10.407,P=0.001)、TRPV4在肝血管瘤与肝细胞癌(c~2=14.005,P<0.001)的表达差异有统计学意义,提示TRPV4对肝脏良恶性疾病的发生过程中可能存在不同程度或不同机制的作用;结果显示TRPV4通道蛋白在肝细胞癌与癌旁肝组织的表达差异有统计学意义(c~2=5.082,P=0.024),提示其在肝癌发生过程中可能存在作用。免疫组化结果结合临床资料数据分析显示:TRPV4的表达差异可能与肿瘤分化程度有关(P=0.025),TRPV4表达差异可能与肝血管瘤大小有关(P=0.019),由于数据较少,还需要进一步验证。2、对肝癌Huh7、HepG-2细胞株分别进行小干扰RNA(si-TRPV4)转染及钌红(RuR)阻滞,经Western blot检测结果可以看出,两种技术都抑制了TRPV4通道蛋白的表达;通过CKK-8、Transwell试验,提示TRPV4蛋白通道的表达差异可能在肝癌增殖、迁移的过程中起作用,对肝癌细胞的迁移作用尤为明显。结论:TRPV4通道蛋白在肝脏不同的良恶性疾病在有着不同程度的表达,且在肝脏恶性肿瘤与癌旁组织中的表达差异有统计学意义,提示其在肝癌发生过程中可能存在作用。对Huh7、HepG-2两种肝癌细胞株的实验提示TRPV4蛋白通道的表达差异可能在肝癌增殖、迁移的过程中起作用。TRPV4通道蛋白的差异表达可能推进了肝癌的发生与发展,明确TRPV4的表达在肝癌发生发展过程中所起的作用可能有助于原发性肝癌的治疗及预后,但仍然需要进一步的蛋白质组学、基因组学、动物及临床试验等证实TRPV4通道蛋白在肝细胞癌中可能发挥的作用。
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