【摘 要】
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乙醛脱氢酶(ALDH,E.C.1.2.1.X)广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。在人类和其他许多动物体内,线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化,所以在细胞解毒研究中乙醛脱
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乙醛脱氢酶(ALDH,E.C.1.2.1.X)广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。在人类和其他许多动物体内,线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化,所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注;同时,乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面也多有研究应用。
本文对啤酒废弃酵母中乙醛脱氢酶进行了提取,采用低浓度偏碱性磷酸盐缓冲液抽提。破碎酵母细胞释放乙醛脱氢酶采用了高压匀浆法,纯化过程采用了硫酸铵分级沉淀、DEAE-SephadexA-50离子交换色谱、SephadexG-150凝胶排阻色谱技术,逐步探索出分离、提取、纯化的合适方法和条件。破碎废弃酵母提取乙醛脱氢酶结果为14.85U/10g酵母泥、匀浆两次结果为18.25U/10g酵母泥,最后得到的乙醛脱氢酶样品纯化了29.6倍,回收率为6.4％。同时考察了酶的性质,结果表明,啤酒酵母线粒体乙醛脱氢酶主要以NAD+为辅酶,催化乙醛反应的最适。pH为9.0,在pH8.0以上保存较为稳定,该酶最适反应温度为30℃;在pH8.5时,乙醛脱氢酶的Km值为1.45mmol/L、Vmax为0.105;金属离子对乙醛脱氢酶活力影响结果为:K+对ALDH有较大的促进作用,Mg2+、Ca2+也表现出一定的激活作用,其他金属离子如Na+、Cs2+、Zn2+对酶活性表现出不同程度的抑制作用。该酶具有广泛的底物专一性,催化包括乙醇在内的某些一级或二级醇、醛和酮的脱氢反应,其中乙醛为乙醛脱氢酶最佳作用底物。
对乙醛脱氢酶活性研究主要集中在其体内催化乙醛代谢性能上,体外试验结果表明,乙醛脱氢酶在人工胃液、肠液中以乙醛为底物的反应,导致乙醛浓度的降低,在人工胃液中乙醛含量降低了33.4％,在人工肠液中乙醛含量降低了60％。体内试验选用的是昆明种小鼠,以小鼠翻正反射消失、恢复时间和小鼠血液中乙醇含量变化为指标进行考察。试验表明乙醛脱氢酶解酒剂量组与对照组,在延长小鼠醉酒时间和缩短小鼠酒后睡眠时间方面有显著差异,表现了解酒效果。同时,小鼠体内乙醇含量检测表明,阳性对照组和乙醛脱氢酶各剂量组,在各个时间点都比对照组小鼠血液中乙醇含量低。
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