c-myc特异核酶逆转膀胱肿瘤EJ细胞恶性表型的实验研究

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c-myc基因是一种细胞癌基因,其编码产物为分子量62KD的DNA结合蛋白。c-myc基因在细胞的增殖与分化过程中起着十分重要的作用,表现在增殖旺盛的细胞中表达增强,而处在静止和分化阶段的细胞不表达或低表达。c-myc基因的异常表达是肿瘤形成的基础之一,在多种恶性肿瘤,包括膀胱肿瘤细胞中都发现c-myc的扩增和高表达。当降低细胞中c-myc基因表达水平时,可诱导细胞出现凋亡。特别是对于c-myc高表达的肿瘤细胞来说,降低c-myc的表达是致死性的。 膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,也是临床上常见的肿瘤之一。对其发病机理和诊治方面的研究是泌尿肿瘤学的难点与重点。人们一直在探索肿瘤治疗的新方法,随着分子生物学的理论和技术的发展,人们在肿瘤基因治疗道路上又迈出了新的步伐。核酶(Ribozyme)技术的发现与应用为肿瘤的基因治疗研究开避了新的道路。 核酶是一类具有酶活性的RNA分子,可序列特异性地与靶RNA分子结合并予切割,进而阻断靶mRNA的表达。切割反应仅需在二价阳离子(如镁离子)参与及中性或略碱性条件下进行。锤头状核酶结构简单,研究应用的最为广泛,它是由催化活性区序列及位其两端的与靶mRNA互补结核的引导序列构成。引导序列决定了核酶的特性,核酶对靶mRNA的切割位点多为GUN(N=A、C、U)。与仅具有单纯封闭作用的反义寡聚核苷酸和反义RNA相比,核酶具有更高的阻断靶mRNA表达的效力。 经计算机分析模拟c-myc基因mRNA的二级结构后,针对其第2外显子mRNA设计合成核酶,同时设计突变核酶作对照。分别构建核酶、突变核酶和c-myc第二外显子体外转录载体。c-myc特异核酶及突变核酶序列
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