【摘 要】
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目的:研究补髓生血丸对再生障碍性贫血的治疗作用,并从调控骨髓微环境角度探究其部分作用机制,为其深度开发和临床合理使用提供实证依据。方法:实验一:补髓生血丸对再生障碍性贫血模型小鼠防治作用及对骨髓微环境的影响取昆明种雄性小鼠,随机分为正常组、模型组、补髓生血丸低剂量组(2.25g·kg-1)、补髓生血丸中剂量组(4.50 g·kg-1)、补髓生血丸高剂量组(9.00 g·kg-1)和阳性药组(再造生
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目的:研究补髓生血丸对再生障碍性贫血的治疗作用,并从调控骨髓微环境角度探究其部分作用机制,为其深度开发和临床合理使用提供实证依据。方法:实验一:补髓生血丸对再生障碍性贫血模型小鼠防治作用及对骨髓微环境的影响取昆明种雄性小鼠,随机分为正常组、模型组、补髓生血丸低剂量组(2.25g·kg-1)、补髓生血丸中剂量组(4.50 g·kg-1)、补髓生血丸高剂量组(9.00 g·kg-1)和阳性药组(再造生血片,2.70 g·kg-1),每组15只。除正常组外,其他各组采用白消安(10 mg·kg-1)和环磷酰胺(20 mg·kg-1)交替腹腔注射给药,连续给药12 d,制备再生障碍性贫血小鼠模型。造模同时各组小鼠按剂量灌胃给药,连续30 d。检测各组小鼠外周血象;采用瑞士-姬姆萨法观察小鼠骨髓涂片、计算骨髓有核细胞数;采用HE染色法观察骨髓病理变化;采用ELISA法检测小鼠血清和骨髓中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、血小板生成素（Thrombopoietin,TPO）、血管细胞黏附因子-1（Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）的含量;采用免疫组化法检测小鼠骨髓微血管密度（MVD）、VEGF和Notch-1的蛋白表达;采用Western-Blot法检测小鼠骨髓VEGF和Notch-1蛋白的相对表达。实验二:补髓生血丸含药血清对小鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）VEGF-Notch-1信号通路的影响取40只SD大鼠,随机分为空白血清组和含药血清组,每组各20只,分别给予蒸馏水和补髓生血丸(9.00 g·kg-1),给药7 d,末次给药1 h后麻醉老鼠,无菌条件下腹主动脉采血,离心获得含药血清。将BMSCs分为空白血清组、含药血清组、DAPT组、Jagged1组、DAPT+含药血清组和Jagged1+含药血清组。采用CCK-8法筛选补髓生血丸干预小鼠骨髓间充质干细胞的最佳作用浓度;采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;采用ELISA法检测细胞上清VEGF、TPO和VCAM-1的含量;采用Western-Blot法检测细胞VEGF和Notch-1蛋白的相对表达。结果:实验一:与正常组比,模型组小鼠外周血红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血红蛋白（HGB）和血小板（PLT）含量显著下降;骨髓腔空虚;血清、骨髓VEGF、TPO、VCAM-1含量均有所下降;骨髓MVD明显降低,VEGF、Notch-1蛋白表达均有明显下降;连续给药30 d后,与模型组相比,给药各组小鼠外周血的各项指标均有不同程度升高;骨髓造血功能改善明显;血清、骨髓VEGF、TPO、VCAM-1含量均呈现上升趋势;骨髓MVD增加;VEGF和Notch-1蛋白表达均呈现上升趋势。实验二:选择20%浓度含药血清作用24 h为最佳作用浓度和作用时间;分别给予10μM DAPT和10μM Jagged1后,与空白血清组相比,DAPT组细胞上清中VEGF和VCAM-1含量均下降明显,VEGF和Notch-1蛋白的相对表达量均显著降低;Jagged1组细胞上清中VEGF升高明显,Notch-1蛋白的相对表达量显著上升。与含药血清组相比,DAPT+含药血清组细胞上清中VEGF含量减少且VEGF和Notch-1蛋白的相对表达量均显著降低;Jagged1+含药血清组VEGF和Notch-1蛋白的相对表达量均显著升高。与Jagged1组相比,Jagged1+含药血清组VEGF和Notch-1蛋白的相对表达量均显著升高。结论:补髓生血丸对再生障碍性贫血模型小鼠有明显的防治作用,从VEGF-Notch-1通路改善骨髓造血微环境可能是其部分作用机制。
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