秋茄(Kandelia candel(L.)Druce)是红树的一种,属于非泌盐型红树,长期生活在海边,具有很强的耐盐性。前期研究显示,秋茄苗木KcBURP基因与KcC2H2型锌指蛋白基因在盐胁迫下表达明显上调,提示这两个基因可能对秋茄耐盐性有所贡献。　　 本文以秋茄为材料,利用前期Microarry分析所获得的KcBURP及KcC2H2型锌指蛋白基因的cDNA序列设计引物,通过RT-PCR,获得这两个基因cDNA的开放读码框(ORF)。序列分析结果显示KcBURP基因的ORF长1131bp,编码一个等电点为9.07、分子量为39.8kD、由375个氨基酸组成的多肽蛋白。KcC2H2型锌指蛋白基因ORF长738bp,由245氨基酸组成,蛋白分子量约26.1kD,理论等电点为8.65。　　 将秋茄KcBURP基因构建到植物表达载pCAMBIA-2300中,转化烟草。选取10个卡那霉素抗性株系进行基因组PCR鉴定,数据表明其中的8个株系为转基因株系。PT-PCR的结果显示在2个转基因株系中KcBURP得到过表达。150 mM NaCl处理后,野生型明显萎蔫,过表达转基因植株长势良好。进一步对野生型和转基因烟草进行光合作用测定,结果显示100mM盐处理显著降低了野生型烟草的净光合速率,而对转基因植株叶片的光合作用影响较小。盐浓度达到200mM时,转基因植株及野生型烟草净光合速率都明显降低,盐胁迫解除后,转基因烟草光合作用的恢复情况明显好于野生型烟草。说明KcBURP的过表达提高了烟草的抗盐性。另外,将KcC2H2型锌指蛋白基因全长cDNA构建到pK7WG2D上,转化烟草,选取8个株系进行基因组PCR鉴定,初步鉴定获得转基因植株。