【摘 要】
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本文研究胶体金免疫层析法(试纸条)与斑点金免疫渗滤法快速检测食品中金霉素残留。采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了金霉素-BSA免疫抗原,戊二醛交联法制备了金霉素-明胶免
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本文研究胶体金免疫层析法(试纸条)与斑点金免疫渗滤法快速检测食品中金霉素残留。采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了金霉素-BSA免疫抗原,戊二醛交联法制备了金霉素-明胶免疫抗原。分别将三种不同的免疫抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法鉴定出多抗中含有抗金霉素的特异性抗体,金霉素-BSA免疫抗原产生的ELISA效价最高达320 000。亲和力实验证明戊二醛法制备的免疫抗原产生的抗体对金霉素的亲和性要高于混合酸酐法制备的免疫抗原产生的抗体对金霉素的亲和性。在胶体金免疫层析法中,将羊抗兔抗体和金霉素-明胶包被抗原包被在硝酸纤维素膜上,分别作为质控线和检测线,组装试纸条。包被在硝酸纤维素膜上的金霉素-明胶固相抗原与被测溶液中游离金霉素竞争结合胶体金标记的抗金霉素多克隆抗体,通过可见的线条颜色深浅判断结果。在斑点金免疫渗滤实验中,将制备的金霉素多克隆抗体包被在硝酸纤维素膜上,用以竞争捕获胶体金标记的金霉素-BSA包被抗原和样品中游离金霉素,通过可见的斑点颜色深浅判断结果。实验结果表明试纸条法的检测限为0.7μg/mL,在金霉素浓度为0.6~1.0μg/mL范围内可实现定量分析。在四环素浓度大于1.0μg/mL时,与金霉素存在交叉反应性,其结果与高效液相测定结果一致。斑点渗滤方法的检测限为0.4μg/mL,在金霉素浓度为0.6~1.0μg/mL范围内可实现定量分析,其结果与酶联免疫方法的测定结果一致。试纸条法与斑点渗滤法均可应用于食品中金霉素残留的快速检测。
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