盐渍肠衣猪瘟病毒的实验室检测研究

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为了促进肠衣贸易更快更好的发展,同时也为了与国际接轨,目前国内外现行猪瘟诊断方法及猪瘟检疫标准,仍没有涉及盐渍肠衣猪瘟检疫方法及标准。因此,有必要尽快建立一种快速、简便、标准化程度高的猪瘟检测技术。 本研究参考GenBank中发表的猪瘟病毒(CSFV)序列,设计一对CSFV特异性引物,建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT-PCR ELISA方法。在RT-PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG-dUTP)标记PCR产物,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT-PCR方法高100倍,可检测出600μL1:100(相当于6.0mg)的肠衣组织中的CSFV,特异性强,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT-PCR和微量杂交系统的条件优化,该方法检测了40例肠衣样品猪瘟病毒;同时用RT-PCR、抗原捕获ELISA和兔体交叉实验作为对照,检测四者的符合性。RT-PCR ELISA、RT-PCR和抗原捕获ELISA的检测结果一致,而兔体交叉反应试验的阳性检出率为上述三者的66.7%,表明RT-PCR ELISA和RT-PCR技术均能应用于盐渍猪肠衣CSFV快速、简便的检测。 同时,本研究通过用RT-PCR ELISA、RT-PCR、抗原捕获ELISA和兔体交叉实验对盐渍了7d、15d、30d、60d、90d的阳性肠衣进行检测。结果表明:盐渍时间达3个月后仍可用RT-PCR ELISA、RT-PCR和抗原捕获ELISA进行检测,盐渍肠衣猪瘟病毒阳性检出率均为100%。但盐渍后猪瘟病毒免疫原性和感染性存在明显差异。而兔体交叉实验只能对15d的进行检测,检测结果与上述三种方法一致,但30d后检测其阳性检出率为0,不能用于盐渍肠衣猪瘟病毒的检测。
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