论文部分内容阅读
目的: 观察丹参多酚酸盐对四氯化碳(CCl4)诱导肝损伤模型和二甲基亚硝胺(DMN)诱导肝纤维化模型的作用，并在体外观察丹参多酚酸盐对过氧化氢(H2O2)诱导肝细胞损伤模型的作用，初步探讨丹参多酚酸盐抗肝损伤和肝纤维化的部分作用机制。 方法: 本论文分为三个部分: 1.丹参多酚酸盐对CCl4诱导大鼠肝损伤模型的作用。55只Wister大鼠按体重分层随机分为2组:正常组(n=10)、造模组(n=45)。造模组予CCL4皮下注射5次诱导肝损伤模型（首次为CCL4原液，其余4次为50％CCL4+橄榄油溶液），首次造模后6小时将所造模动物按体重分层随机分为模型组(n=12)、NAC组(n=11)以及丹参多酚酸盐高剂量组(n=11)、低剂量组(n=11)。正常组、模型组分别予生理盐水2ml/kg体重腹腔注射;丹参多酚酸盐高、低剂量组分别予丹参多酚酸盐40mg/kg、20mg/kg体重腹腔注射;NAC组予NAC500mg/kg体重灌胃。连续给药两周后处死所有大鼠。观察大鼠肝/体、脾/体;试剂盒检测血清ALT、AST、TBIL、ALP、TBA水平和肝组织MDA、GSH、ASAFR的含量;HE染色观察大鼠肝脏炎症情况，并作半定量分析。 2.丹参多酚酸盐对DMN诱导大鼠肝纤维化模型的作用。70只Wister大鼠按体重分层随机分为2组:正常组(n=10)、造模组(n=60)。造模组予DMN10μg/kg体重诱导肝纤维化模型，每周连续3天造模，共造模3周。造模结束后将造模组大鼠按体重分层随机分为模型组(n=12)、丹参多酚酸盐高剂量组(n=12)、中剂量组(n=12)、低剂量组(n=12)以及FZHY组(n=12)。正常组与模型组予生理盐水2ml/kg体重腹腔注射;丹参多酚酸盐高、中、低剂量组分别予丹参多酚酸盐40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg体重腹腔注射;FZHY组予扶正化瘀方330mg/kg体重灌胃，每日1次，共连续2周。连续给药两周后处死所有大鼠，观察大鼠肝/体、脾/体;试剂盒测定大鼠血清ALT、AST、TBIL、TBA、ALP的含量以及肝组织MDA、GSH和ASAFR的含量;HE染色和天狼星红染色分别观察肝组织炎症和胶原沉积情况。免疫组化检测肝组织α-SMA表达情况。 3.丹参多酚酸盐对H2O2诱导肝细胞损伤模型的作用。将丹参多酚酸盐分别与HL-7702和AML-12肝细胞孵育;H2O2分别刺激HL-7702和AML-12肝细胞诱导肝细胞损伤模型，CCK8检测细胞存活率。试剂盒检测肝细胞线粒体表达、肝细胞线粒体膜电位(JC-1)表达;高内涵检测肝细胞细胞色素C(cyto-C)表达;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。 结果: 1、与正常组相比，模型组大鼠体重明显降低;肝重及肝/体明显升高;血清ALT、AST、ALP以及TBA含量明显升高;肝组织中MDA含量升高，ASAFR、GSH含量降低;肝组织内大量脂肪空泡形成，汇管区、中央静脉周围炎性细胞浸润明显，肝细胞水样变、气球样变。与模型组相比，丹参多酚酸盐高、低剂量组及NAC组大鼠体重明显升高，高剂量组的肝重、肝体比和NAC组大鼠的肝体比明显下降。生化方面，丹参多酚酸盐高剂量组及NAC组ALT、AST和MDA含量明显下降，GSH及ASAFR含量则明显升高，且丹参多酚酸盐高剂量组明显优于NAC组。肝组织炎症情况有所改善。 2、与正常组相比，模型组大鼠脾重和肝/体、脾/体均明显升高;血清ALT、AST、TBA及ALP含量明显升高，肝组织中MDA含量升高，ASAFR、GSH含量降低;肝组织内可见严重的出血性坏死并伴有较多量的炎症细胞在坏死区浸润，肝细胞束排列紊乱，桥接坏死明显，汇管区胶原纤维组织增厚并向坏死区延伸;肝组织α-SMA的表达明显增强。与模型组相比，丹参多酚酸盐高剂量组大鼠的脾体比和FZHY组大鼠的肝重、脾重、肝/比以及脾/体均明显下降;ALT、AST、TBIL、TBA、ALP和MDA水平均明显降低而GSH及ASAFR含量则有所升高;病理方面，肝组织炎症及纤维化情况明显改善;肝组织α-SMA的表达明显减弱。 3、HL-7702、AML-12肝细胞分别与不同浓度的丹参多酚酸盐孵育后无明显损伤。与正常对照组相比，模型对照组肝细胞细胞存活率下降，肝细胞内线粒体表达减少，肝细胞线粒体膜电位下降，胞浆内CytoC表达增多，细胞周期延长，早期凋亡的肝细胞增多;与模型对照组相比，丹参多酚酸盐及NAC在多个工作浓度对H2O2诱导HL-7702及AML-12肝细胞损伤模型均有不同程度的保护作用，可明显提高损伤的肝细胞的存活率。丹参多酚酸盐可明显增强损伤的肝细胞内线粒体表达，增强肝细胞内线粒体膜电位，改善损伤的肝细胞的细胞周期，减少损伤的肝细胞发生早期凋亡。 结论: 1.丹参多酚酸盐对CCL4诱导的大鼠肝损伤模型具有保护作用。 2.丹参多酚酸盐对DMN诱导的大鼠肝纤维化模型具有保护作用。 3.丹参多酚酸盐对H2O2诱导肝细胞损伤模型均有不同程度的保护作用，可明显减轻线粒体损伤，提高肝细胞的存活率。