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神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是小儿最常见的恶性实体肿瘤之一,其恶性程度高,发病部位隐匿,较早发生多部位转移,手术切除率低,其对放射和化学疗法敏感度不高,而且极易产生耐受,因此病死率一直居高不下,严重威胁儿童生命健康。环氧合酶(cyclooxygenase,COX)又称前列腺素合成酶(prostaglandin synthetase,PGS),是花生四烯酸(arachidonic acid,AA)合成前列腺素(prostaglandin, PG)的限速酶。近年来,在一些肿瘤组织中检测到COX-2的大量表达,选择性COX-2抑制剂可抑制肿瘤的生长。本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂CAY10404对体外培养的人NB细胞SK-N-SH生长的影响及其可能的机制。[目的]研究选择性COX-2抑制剂CAY10404对人NB细胞SK-N-SH生长的抑制作用及其可能的机制。[方法]人NB细胞株SK-N-SH于体外培养,每日于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。分别以30,60,90,120μmol/l浓度的CAY10404作用细胞,于不同的作用时间收集细胞,采用MTT比色法计算抑制率并绘制量-效曲线,胎盼蓝拒染法观察细胞群体倍增时间(TD),倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,RT-PCR法检测bcl-2,bax,survivin基因的表达变化,采用免疫组化SP法观察药物处理前后COX-2,PCNA,Bcl-2,Bax, Survivin等蛋白的表达情况。[结果] (1)不同浓度的CAY10404作用人NB细胞SK-N-SH后,其增殖受到抑制,其作用呈时间和剂量依赖性;(2)免疫组化显示经CAY10404作用后,SK-N-SH细胞内COX-2和PCNA蛋白表达量较空白对照组明显下降;(3)流式细胞仪表明经不同浓度CAY10404作用48h后,与空白对照组相比,细胞凋亡率增高,并呈剂量依赖关系,组间差异具有显著性(p<0.05),低浓度组(30,60μmol/l)SK-N-SH细胞周期无明显变化,高浓度组(90,120μmol/l)G0/G1期细胞比例下降;(4)免疫组化和RT-PCR测定显示随着CAY10404浓度增加,bcl-2,survivin表达下调,而bax表达上调。[结论] (1)NB细胞中存在COX-2的高表达,选择性COX-2抑制剂CAY10404对人NB细胞SK-N-SH的增殖有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,其作用可能是通过COX-2依赖性途径实现的;(2)CAY10404诱导SK-N-SH细胞的凋亡,并引起其细胞周期的重新分布,bcl-2、survivin、bax等凋亡相关基因可能参与了CAY10404诱导的SK-N-SH细胞凋亡过程。