昆仑雪菊中结合型降压活性成分的分离与鉴定

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昆仑雪菊在降血压方面具有显著功效而被广泛应用于民间,然而因技术手段限制无法充分开发雪菊的价值,全面研究雪菊的功效具有重要意义。结合型昆仑雪菊活性成分因与细胞壁以共价键结合,难以直接用溶剂萃取出来。本研究采用碱降解法使结合型化合物释放出来并通过响应面分析法优化降解条件,在此基础上利用不同溶剂对降解产物进行提取,并筛选出最佳的溶剂得到粗提物,利用常压硅胶柱层析和SepdexLH-20凝胶柱层析对粗提物中的化合物进行分离纯化得到单体化合物,采用DPPH及ABTS法对单体化合物进行抗氧化活性评价,并通过体外ACE酶抑制试验对单体化合物进行评价,得到以下结论。(1)最佳的碱降解单因素条件为:时间为2h,温度为50℃,NaOH浓度为2mol·L-1,最佳提取溶剂为正丁醇,在此基础上设计了响应面试验,得到最优工艺参数为降解温度56℃,碱液浓度1.65mol·L-1,降解时间2h,该工艺条件可使总黄酮得率达23.0908mg·g-1,验证结果为23.067mg·g-1。所选3因素的二次多项回归方程为:Y=-27.6734+1.5389A+6.9080B+1.3468C-0.0663AB+0.0435AC+0.0525BC-0.0134A2-0.9845B2-0.9570C2。(2)从粗提物中分离得到8个单体化合物,采用核磁共振技术(NMR)、电喷雾质谱技术(ESIMS)等鉴定其化学结构,8个单体化合物的结构分别为:4,6-二羟基-2-[6-羟基-1,5-二甲基-4-己烯基]-5-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷、金鸡菊查尔酮-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖、香草醛、3’,4’,7,8-四羟基二氢黄酮、3’,4’,7,8-四羟基黄酮、2-苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷、芳樟醇-3,6-氧合-β-D-吡喃葡萄糖苷、对香豆酸甲酯,其中4,6-二羟基-2-[6-羟基-1,5-二甲基-4-己烯基]-5-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷为首次分离得到。(3)活性测定结果表明化合物1、2、4、5具有较强的抗氧化能力,化合物1、2、4、5对DPPH的半数抑制率IC50分别为92.21μmol·L-1、17.29μmol·L-1、70.09μmol·L-1和50.07μmol·L-1,对ABTS自由基半数抑制率IC50分别为43.06μmol·L-1、22.86μmol·L-1、33.40μmol·L-1和32.52μmol·L-1。(4)ACE酶抑制活性表明化合物2、4、5具有较强的ACE酶抑制活性。化合物2、4、5对ACE酶的半数抑制率IC50分别为175.18μmol·L-1、230.60μmol·L-1和212.71μmol·L-1。
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