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目的:检测孕激素(Progesterone,P)对不同孕激素受体(Progesterone receptor,PR)卵巢癌细胞增殖、凋亡及FOXO1表达的影响,探讨孕激素在卵巢癌中作用的分子机制,为卵巢癌的治疗提供相关理论依据。方法:实验分组:对照组(孕激素浓度为0μmol/L)、实验组(孕激素浓度分别为6.25、25、100μmol/L)。取生长良好的卵巢癌细胞HO-8910(PR高表达)和SKOV3(PR低表达)作为研究对象。1.不同浓度孕激素(6.25、25、100μmol/L)分别处理两株细胞,对照组加入等量不含孕激素的培养液,48h后倒置显微镜观察细胞形态改变;2.不同浓度孕激素(6.25、25、100μmol/L)处理两株细胞,对照组加入等量不含孕激素的培养液,分别于24h、48h、72h用CCK8法检检测对照组和各实验组细胞的增殖情况;3.取生长良好的卵巢癌细胞HO-8910和SKOV3,不同浓度孕激素(6.25、25、100μmol/L)分别处理两株细胞,对照组加入等量不含孕激素的培养液,作用48h后Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测对照组和各实验组细胞凋亡情况;4.取生长良好的卵巢癌细胞HO-8910和SKOV3,不同浓度孕激素(6.25、25、100μmol/L)分别处理两株细胞,对照组加入等量不含孕激素的培养液,培养48h后提细胞蛋白,免疫印迹法(Western Blot)检测各组PR、FOXO1蛋白的表达。结果:1.孕激素作用48h后倒置显微镜下细胞形态:对照组卵巢癌细胞HO-8910、SKOV3类似上皮样细胞,为类圆形、梭形、多角形,排列紧凑,部分细胞伸出伪足;实验组细胞间隙增大,贴壁细胞减少,漂浮细胞增多,部分细胞破碎,间质可见细胞碎片。孕激素浓度越大,以上镜下特征越明显,相同孕激素浓度作用相同时间,以上镜下特征HO-8910细胞较SKOV3细胞明显,当孕激素浓度达100μmol/L时,HO-8910的贴壁细胞变成长梭形,SKOV3细胞轮廓不清,出现多个细胞融合的现象。2.对照组和实验组孕激素(6.25、25、100μmol/L)作用不同时间后细胞增殖抑制率(%):(1)HO-8910细胞:(24h)0.50±1.08、15.35±1.13、25.56±0.90、43.65±1.74,(48h)-0.15±1.39、24.07±0.63、43.61±3.42、64.20±1.39,(72h)-1.07±1.66、43.05±2.27、62.08±1.00、73.09±1.41;(2)SKOV3细胞:(24h)5.8±1.08、8.46±1.18、9.96±0.69、13.95±2.70,(48h)-0.15±1.39、13.46±1.04、16.15±1.19、25.84±2.04,(72h)0.43±1.24、16.87±0.66、26.87±2.38、32.24±1.14。增殖抑制率比较:孕激素可抑制HO-8910、SKOV3细胞增殖,相同浓度作用时间延长以及相同时间浓度增大,抑制作用增强,细胞增殖抑制率呈时间-效应、剂量-效应关系。(1)对HO-8910细胞,相同时间以不同浓度孕激素作用后,实验组与对照组抑制率比较及各实验组抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05),相同浓度孕激素分别作用24h、48h、72h,各时间段实验组抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05);(2)对SKOV3细胞,相同浓度孕激素分别作用24h、48h、72h后实验组抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05),相同时间以不同浓度孕激素作用,作用24h后对照组与100μmol/L组抑制率比较以及作用48h、72h对照组与实验组抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),作用24h对照组与6.25、25μmol/L两组抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05);(3)相同的作用浓度和时间,HO-8910细胞和SKOV3细胞抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05),孕激素对HO-8910细胞抑制增殖作用明显强于SKOV3。3.对照组和实验组孕激素(6.25、25、100μmol/L)作用48h后细胞凋亡率(%):(1)HO-8910细胞:凋亡率分别为1.75±0.22、5.26±0.20、16.00±0.40、42.50±3.96,随着孕激素浓度增大,凋亡率升高,各浓度组间凋亡率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)SKOV3细胞:孕激素浓度为0、6.25、25、100μmol/L作用48h后凋亡率依次为1.44±0.55、2.75±0.66、4.11±0.47、6.96±0.41,随着孕激素浓度增大,凋亡率升高,对照组与6.25μmol/L组、25μmol/L组与100μmol/L组凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05),其余各浓度组间凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)相同浓度孕激素作用48h,HO-8910凋亡率较SKOV3高,两株细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4.孕激素作用48h后HO-8910、SKOV3细胞FOXO1的表达增加,随着孕激素浓度的增加,FOXO1表达增高,对照组与各实验组FOXO1表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在HO-8910细胞中,各实验组间FOXO1的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),在SKOV3细胞中,6.25μmol/L组与25μmol/L组、25μmol/L组与100μmol/L组FOXO1表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HO-8910、SKOV3细胞中实验组PR-B及PR-A蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义。结论1.孕激素对HO-8910和SKOV3细胞的抑制增殖作用呈时间-效应、剂量-效应关系,促进凋亡作用存在剂量-效应关系,孕激素对HO-8910细胞抑制增殖和促进凋亡作用较SKOV3细胞明显;2.孕激素可促进HO-8910和SKOV3细胞中FOXO1的表达,孕激素浓度越高,FOXO1表达越高,孕激素可能通过影响FOXO1的表达对卵巢癌细胞发挥抑制增殖、促进凋亡的作用;3.孕激素浓度不影响HO-8910、SKOV3细胞中PR-B和PR-A的蛋白表达。