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目的:优化转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)诱导A549细胞表型转化的条件,评价虎杖主要单体成分(虎杖苷、白藜芦醇及大黄素)对TGF-β诱导A549细胞表型转化的干预作用。优化血小板衍化生长因子-BB(Platelet Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB)诱导 A549 细胞表型转化,评价虎杖主要成分对PDGF-BB诱导A549细胞表型转化的干预作用。优化TGF-β诱导WI-38细胞表型转化的条件,评价虎杖主要单体成分对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化的干预作用。通过在细胞水平探讨具有抗肺纤维化活性药物与细胞表型转化之间的相关性,发现可靠的蛋白评价靶点,建立以间质细胞表型特征转化为依据的药物评价筛选模型,以期为肺纤维化疾病在细胞水平药物筛选和治疗提供新的思路和依据。方法:1.虎杖主要单体成分对A549细胞毒性研究:取对数生长期A549细胞,种植于96孔板,以不同浓度的虎杖苷、白藜芦醇、大黄素及芍药苷药液作用于A549细胞72 h,以MTT法检测细胞活力值,评价虎杖主要单体成分对A549细胞的细胞毒性。2.虎杖主要单体成分对TGF-β诱导A549细胞表型转化的干预作用:以不同浓度的TGF-β作用于对数生长期的A549细胞不同时间,以SM α-actin等间质细胞蛋白为指标蛋白,确立有效细胞转化模型;根据建立的细胞转化模型,同时给予虎杖主要单体成分和TGF-β,评价虎杖主要单体成分对TGF-β诱导A549细胞表型转化的干预作用。3.虎杖主要单体成分对PDGF-BB诱导A549细胞表型转化的干预作用:以TGF-β、Ang Ⅱ及PDGF-BB作用于对数生长期的A549细胞24 h,以SMα-actin等间质细胞蛋白为指标蛋白,确立有效的细胞转化评判依据;根据建立的细胞转化诱导模型,同时给予虎杖主要单体成分和PDGF-BB,评价虎杖主要单体成分对PDGF-BB诱导A549细胞表型转化的干预作用。4.虎杖主要单体成分对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化的干预作用:以TGF-β、Ang Ⅱ及PDGF-BB作用于对数生长期的WI-38细胞24 h,以SMα-actin等间质细胞蛋白为指标蛋白,确立有效细胞转化模型;根据建立的细胞转化模型,同时给虎杖主要单体成分和TGF-β,评价虎杖主要单体对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化的干预作用。结果:1.虎杖主要单体成分对A549细胞毒性实验结果显示,虎杖苷在31.25～500 μM浓度范围内给予A549细胞,对其有一定抑制作用,但无细胞毒性;白藜芦醇在4～80 μM浓度范围内给予A549细胞,有一定的抑制作用但无细胞毒性;大黄素在8.75～17.5 μM浓度范围内给予A549细胞,有一定的抑制作用,但无细胞毒性,大于35 μM浓度给药,有明显的细胞死亡,即有明显细胞毒性;芍药苷在50～200 μM范围内给予A549细胞,对其有一定的促增殖作用且呈剂量依赖性,500～1000 μM范围内对A549细胞无细胞毒性作用,但表现出一定的细胞抑制作用。2.虎杖苷主要单体成分对TGF-β诱导A549细胞表型转化的干预实验结果显示,TGF-β 诱导 A549 细胞表型转化后,E-cadherin、SMα-actin、vimentin及fibronectin蛋白表达上调,综合免疫荧光和western blot结果,1 ng/mL TGF-β诱导A549细胞24 h,表型转化最明显。以虎杖苷(25 μM)、白藜芦醇(20 μμM)、大黄素(3.5 μM)、芍药苷(20 μM)和TGF-β(1 ng/mL)给药A549细胞,结果显示虎杖苷、白藜芦醇及芍药苷抑制TGF-β诱导A549细胞表型转化。3.虎杖苷主要单体成分对PDGF-BB诱导A549细胞表型转化的干预实验结果显示,TGF-β(1ng/mL)、Ang Ⅱ(6nmol/L)和 PDGF-BB(60ng/mL)诱导 A549 细胞表型转化后,E-cadherin、SM α-actin、vimentin 及 fibronectin蛋白表达上调,综合免疫荧光和western blot结果,60 ng/mL PDGF-BB诱导A549细胞24h,表型转化最明显。以虎杖苷(25μM)、白藜芦醇(20μM)、大黄素(3.5 μM)、芍药苷(20 μM)和 PDGF-BB(60 ng/mL)给予 A549 细胞,结果显示虎杖苷、白藜芦醇、大黄素及芍药苷不同程度抑制PDGF-BB诱导A549细胞表型转化,其中大黄素对PDGF-BB诱导A549细胞表型转化的抑制效果最佳,且与大黄素呈浓度相关性。4.虎杖苷主要单体对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化的干预实验结果显示,TGF-β(1 ng/mL)、Ang Ⅱ(6 nmol/L)和 PDGF-BB(60 ng/mL)诱导WI-38 细胞表型转化后,E-cadherin、SMα-actin、vimentin 及 fibronectin 蛋白表达上调,综合免疫荧光和western blot结果,1ng/mL TGF-β诱导WI-38细胞24 h,表型转化最明显。以虎杖苷(25 μM)、白藜芦醇(20 μM)、大黄素(3.5μM)、芍药苷(20μμM)和TGF-β(1ng/mL)给予WI-38细胞,荧光结果显示虎杖苷、白藜芦醇及芍药苷抑制TGF-β诱导WI-38细胞表型转化,而大黄素对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化几乎没有抑制作用。而western blot结果显示大黄素和芍药苷对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化有抑制作用,白藜芦醇和虎杖苷仅有轻微抑制作用。综上所述,芍药苷对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化有明显抑制作用。结论:虎杖主要单体成分可抑制TGF-β诱导A549细胞表型转化;虎杖主要单体成分可抑制PDGF-BB诱导A549细胞表型转化;虎杖主要单体成分对TGF-β诱导WI-38细胞表型转化干预作用不明显。