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ω-3型长链多不饱和脂肪酸(PUFAs),尤其是DHA(22∶6)和EPA(22∶5)由于其显著的生理功效而受到广泛关注。DHA可促进智力和视力发育因此被作为婴幼儿的营养添加剂。除此之外,DHA在降低血脂、调节免疫系统、防治老年痴呆及抗癌等方面具有重要作用。DHA存在于海洋微生物,如微藻或真菌中(包括常用的裂殖弧菌Schizochytrium sp.)。有别于鱼油来源,微生物包含了DHA的基因酶生物合成机制。Schizochytrium sp.由于其“生长快,产量高”通常作为替代传统鱼油的理想来源。Schizochytrium sp.产油脂量占其比重的70%,DHA含量高达总脂肪酸的40%,约有90%为中性油脂。ω-3 PUFAs主要以甘油酯、乙酯及游离脂肪酸的形式存在,甘油酯型被认为是最佳的吸收模式。另外,脂肪酸在甘油酯上的位置分布对机体的消化吸收有很重要的影响。到目前为止只研究了部分产DHA菌株的油脂组分及脂肪酸的组成。为了改善DHA油脂的品质、加深对机体营养吸收的理解,对DHA油脂组分分析及脂肪酸分布情况的研究具有很大的意义。本论文应用现代色谱法于Schizochytrium sp.油脂体系,实现对DHA油脂甘油酯组分的分析。主要结果如下: (1) DHA油脂含中性油脂的分析研究。对柱层析分离纯化Schizochytriumsp.中性脂组分进行了详细的研究。研究结果表明,DHA油脂中约有90%以上为中性油脂,其中甘三酯(TGs)含量比较大(88.62%-89.62%),甘二酯(DGs)和单甘油酯(MGs)含量比较小(仅占4.39%-5.44%)。同时发现,不饱和脂肪酸DHA在TGs中的含量(43.04%-44.15%)高于微藻DHA精油中的含量(36.14%-37.45%),可见DHA主要是以TGs的形式存在于油脂中。 (2) DHA-甘油酯的定性定量分析。基于反相HPLC法测定Schizochytriumsp.油脂中DHA-甘油酯组分,样品预处理方法简单,DHA-甘油酯组分在45 min内即可被检测出来,该方法重复性好,且消耗的溶剂少。对HPLC测定油脂样品中DHA-甘油酯的色谱条件进行了探索优化,通过用相关系数、精密性、回收率衡量方法的灵敏度、可重复性和准确性,对方法学做一全面的验证。相关系数达到0.9958-0.9998,且样品的回收率达到93.47-102.25%。最终鉴定出DHA油脂中含有3.38%的TriDHA,0.54%的DiDHA以及0.065%的MonoDHA。通气量对细胞的生长,脂质积累和DHA的生产有较大的影响。当通气量为250 m3/h时,TGs,DHA及TriDHA均达到了最高值,且TGs含量明显影响到了TriDHA和DHA的含量,即DHA及TriDHA的含量随着TGs含量升高而升高。 (3) TGs酰化位置分布的专一性分析。首先对胰脂酶水解条件进行了优化,并对经典的胰脂酶法进行修改以适应该体系的分析,最后测定Sn-2脂肪酸位置分布。在最佳胰脂酶水解条件下,该方法获得的结果如下:饱和脂肪酸(C14∶0和C16∶0)在Sn-2上含量均较少,而在Sn-1,3中较多。不饱和脂肪在Sn-2及Sn-1,3位置上均有分布,其中EPA在Sn-2及Sn-1,3上的位置分布几乎是平均的。DHA占Sn-2中所有脂肪酸含量的52.57%,而只占Sn-1,3中的35.34%。为DHA油脂的营养学提供理论参考数据。