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近年发现的一类宿主限制因子,干扰素诱导跨膜蛋白(IFITMs)。该类因子可抑制包膜和无包膜病毒的增殖,并且在多种细胞中有一定的组成型表达,其中经研究证实IFITM3可以抵抗多种病毒的感染,其中包括西尼罗河病毒,流感病毒,登革热等。FITM3可通过多种途径来发挥抗病毒感染作用。据报道,IFITM3对以H1N1、H5N1、H7N9及H3N2、为外膜的假型病毒的进入具有抑制作用。其能够有效作用于宿主细胞表面受体与流感病毒表面糖蛋白血凝素结合之后,包膜与内吞形成的胞内体膜融合之前的感染胞内体过程。为深入研究IFITM3的抗病毒作用,本研究首先利用腺病毒pacAd载体构建了含有人干扰素诱导跨膜蛋白IFITM3目的基因的穿梭质粒,再与骨架质粒pAd5共转染HEK-293细胞,包装出含IFITM3基因的重组腺病毒,随后用PCR及Western blot检测该重组野生型腺病毒、腺病毒与正常细胞中IFITM3蛋白表达量的差异。本研究同时用Western blot方法检测同源细胞A549和异源细胞MDCK中IFITM3蛋白的表达,以选择合适的细胞模型。用MTS方法分别检测重组腺病毒对MDCK和A549细胞活性的影响。流感病毒感染细胞,用MTS方法,选择病毒滴度为100 MOI、感染时间为24h进行实验,检测细胞活性变化。MDCK口A549细胞接种重组腺病毒以及流感病毒后12h、24h、36h和48h分别收取RNA和细胞蛋白,用实时荧光定量PCR方法检测流感病毒M2基因表达量,用Western blot方法检测流感病毒HA蛋白表达量。PCR及Western blot检测显示本研究新构建的重组腺病毒IFITM3蛋白表达量显著高于野生型腺病毒和正常细胞,表明成功构建含有IFITM3的重组腺病毒。MTS实验发现腺病毒对细胞活性有一定抑制作用且具有时间和剂量依赖性,但rAd-IFITM3与wtAd5组之间无显著性差异,而流感病毒在感染细胞24h后,对细胞产生明显的抑制作用,且呈明显的时间与剂量依赖效应。Western blot结果显示,在接种流感病毒后12h时,HA蛋白的表达量最低且显著低于其他时间点。荧光定量PCR结果表明,过表达ITIFM3的A549细胞在不同时间点均对流感病毒转录水平有明显的抑制作用；对于MDCK细胞,6h、12h具有明显抑制作用。综上所述,本实验成功构建了含有IFITM3基因的重组腺病毒rAd-IFITM3,该重组腺病毒rAd-IFITM3在接种MDCK和A549细胞后,可在蛋白表达水平和基因转录水平上对流感病毒起到抑制的作用。本研究为深入探讨IFITM3限制病毒感染的作用机制提供了基础。