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目的:青光眼是一组以特征性眼底损伤和视野缺损为共同临床表现的不可逆性致盲眼病。虽然人类已经明确高眼压是青光眼发病的重要危险因素,但是,至今该病的确切病因、发病机制尚不完全清楚。目前已知,青光眼的主要组织病理学改变发生于视乳头筛板处,而该处主要的细胞类型是星形胶质细胞。有动物实验表明在神经系统损伤早期神经生长因子分泌增加,其中,睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor,CNTF)分泌量随损伤时间延长而增加。目前已知CNTF可以诱导视网膜神经细胞分化,减少神经细胞凋亡,促进细胞再生。在CNTF和星形胶质细胞之间的关系上,现有研究结果表现出双向性:一方面,有研究证实,在中枢神经系统,星形胶质细胞在损伤早期可分泌CNTF;另一方面,体外实验表明外源性睫状神经营养因子也可以使星形胶质细胞活化。以往的研究已证实压力可以引起星形胶质细胞活化并进而影响视乳头筛板区视神经生存微环境。因此本实验通过压力介导大鼠视乳头星形胶质细胞活化,研究压力对星形胶质细胞分泌睫状神经营养因子的影响,以期明确压力是否也能通过星形胶质细胞和神经营养因子途径影响视盘区视神经生存微环境。方法:(1)分离并提取大鼠视乳头区星形胶质细胞;(2)免疫荧光鉴定细胞;(3)三种状态体外培养:常压24h培养(0mmHg组),加压24h培养(60mmHg组),60mmHg加压处理24h后换液接续0mmHg 24h培养(60+0mmHg组);(4)星形胶质细胞活化检测:Real-time PCR及Western blot法检测大鼠视乳头星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β分泌情况;(5)星形胶质细胞表达CNTF检测:Real-time PCR及Western blot法;(6)相同压力连续作用下星形胶质细胞活化分泌CNTF的时间梯度变化:将细胞在60mmHg下分别培养0h、6h和24h,然后检测GFAP及CNTF的分泌情况。结果:(1)分离提纯细胞的免疫荧光结果为NCAM(+)、GFAP(+)、A2B5(—),为ⅠB型星形胶质细胞;(2)GFAP的mRNA表达和蛋白表达在60mm Hg组、60+0mmHg组两种培养状态下均升高,与0mmHg组比较均有统计学意义(P<0.05);60+0mmHg组与60mmHg组相比下降,两者间有统计学意义(P<0.05);(3)TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌量在60mm Hg组升高,与0mmHg组比较三者均有统计学意义(P<0.05);三者在60mmHg组也高于60+0mmHg组,具有统计学意义(P<0.05);(4)CNTF的mRNA表达和蛋白表达在60mm Hg组、60+0mmHg组两种培养状态下均有升高,与0mmHg组比较均有统计学意义(P<0.05);60+0mmHg组与60mmHg组相比下降,具有统计学意义(P<0.05);(5)在相同压力下GFAP及CNTF的表达量均随时间的增加而增加,且两两相比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:星形胶质细胞常压生存下可以分泌CNTF,受高压作用后星形胶质细胞活化,分泌CNTF增加;且相同压力下CNTF的分泌量随时间增加而增加;撤消压力继续培养,星形胶质细胞依然处于活化状态,但强度趋于缓解,CNTF也分泌减弱。表明压力可以通过介导星形胶质细胞活化影响CNTF的分泌,活化状态下CNTF分泌增加,但随着活化强度的下降而减弱。