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目的本研究检测了胃癌前病变患者血清外泌体中长链非编码RNA(Long noncoding RNA,Lnc RNA)的特异性表达,研究胃癌前病变患者血清外泌体对GES-1细胞活性的作用;使用全反式视黄酸(All trans retinoic acid,ATRA)进行干预,观察ATRA对GES-1细胞活性的调节作用。同时构建胃癌前病变的大鼠模型,造模成功后使用ATRA进行持续干预,通过观察大鼠血清外泌体及胃组织中Lnc RNA HOXA10的表达,结合病理表现探讨ATRA通过下调Lnc RNA HOXA10的表达来实现抑制胃癌前病变状态恶性转化的作用。方法提取胃癌前病变患者及正常对照人群血清中的外泌体,根据课题组前期测序结果,采用q RT-PCR检测差异表达的Lnc RNA;将胃癌前病变患者血清外泌体与GES-1细胞在无外泌体血清培养基中共培养作为实验组,在培养基中加入5μM ATRA作为实验干预组,其中外泌体及视黄酸浓度为0为空白对照组,仅在培养基中加入5μM ATRA作为干预对照组,观察各组细胞增殖、凋亡及周期的变化,检测各组细胞中Lnc RNA HOXA10的表达;购买3周龄的雌性Wistar大鼠,实验开始前进行7-10天的适应性喂养。之后对对照组大鼠使用普通饲料及自由饮水喂养,命名为正常对照组(Normal control,NC)。对需要构建模型的大鼠使用0.03%雷尼替丁饲料及添加了170μg/ml单功能烷化剂甲基硝基亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)的饮用水喂养,命名为模型组(Model group,MOD)。造模成功后,再将模型组的wistar大鼠进行随机分组后进行相应的干预:使用普通饲料及正常饮水喂养的为阳性对照组(Positive control group,PC),持续使用0.03%雷尼替丁饲料及170μg/ml MNNG自由饮水喂养的为持续干预组(MNNG intervention group,MNNG),在持续干预组的基础上给予每天40μg/kg ATRA灌胃处理的为持续干预+治疗组(MNNG+ATRA intervention group,MA),在模型对照组基础上给予每天40μg/kg ATRA灌胃处理的为单纯治疗组(ATRA intervention group,ATRA),干预6周后收集各组大鼠血清及胃组织。提取大鼠血清外泌体,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)检测大鼠胃组织及血清外泌体中Lnc RNA HOXA10表达水平;将各组大鼠后胃组织幽门部病理切片进行HE染色,观察各组大鼠胃粘膜病理变化;使用ELISA试剂盒检测各组大鼠血清及组织中ATRA水平。结果与胃癌前病变患者血清外泌体共培养的GES-1细胞较空白对照组而言,细胞增殖活性显著升高(P<0.01),细胞凋亡减少(P>0.05),Lnc RNA HOXA10表达水平升高(P>0.05)。在培养基中加入5μM ATRA干预后,各组细胞活性均显著下降(P<0.01),细胞凋亡增加(P>0.05),S期细胞比例显著下降(P<0.05)。NC组与MOD组大鼠体重在构建模型八周后出现差异(P<0.05)。随机处死MOD组与NC组大鼠后观察幽门部胃粘膜病理变化,病理结果显示,MOD组大鼠胃粘膜于NC组大鼠相比,出现腺体萎缩的趋势,将MOD组大鼠进行分组干预后检测Lnc RNA HOXA10及视黄酸水平,并观察各组大鼠胃粘膜病理变化,结果显示:与NC组相比,MNNG组胃组织中Lnc RNA HOXA10水平显著升高(P<0.05),视黄酸干预后,与MNNG组相比,ATRA组胃组织中Lnc RNA HOXA10水平显著下调。血清外泌体q RT-PCR结果显示,与NC组相比,PC组、MNNG组、MA组中Lnc RNA HOXA10水平均显著上调(P<0.05),视黄酸干预后,与MNNG组相比,ATRA组中Lnc RNA HOXA10水平显著下调(P<0.05)。ELISA检测结果显示,视黄酸干预后大鼠血清中ATRA水平显著上升(P<0.05),胃组织中ATRA水平上升,但视黄酸升高水平不显著(P>0.05)。组织病理结果显示,与NC组相比,PC组、MA组大鼠胃体可见明显腺体萎缩,MNNG组大鼠胃体粘膜层消失,ATRA组大鼠胃体腺体与NC组相比无显著差异。结论ATRA可以抑制Lnc RNA HOXA10的表达,从而降低胃癌前病变患者血清外泌体中Lnc RNA HOXA10对GES-1细胞活性的促进作用。同时通过ATRA干预后,大鼠胃癌前病变恶性转化得到有效抑制,Lnc RNA HOXA10水平下调,血清中ATRA水平显著身高,因此我们推测ATRA可以通过抑制Lnc RNA HOXA10异常表达抑制胃癌前病变的恶性转化。