论文部分内容阅读
原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种自身免疫介导的渐进性胆汁淤积性肝脏疾病,涉及诸多的免疫细胞参与疾病发展进程,但是每种细胞所发挥的特定功能却依然不甚明确。CD4+Foxp3+调节性T细胞(Tregs)在维持免疫稳态,阻止过度免疫应答方面具有不可替代的作用,无论在人类PBC还是小鼠模型中均出现了明显的Tregs缺陷。本论文的研究工作基于PBC小鼠疾病模型一一显性失活的转化生长因子βⅡ型受体(dnTGF-βRⅡ转基因小鼠,寻找对三个基本问题的答案：第一、小鼠PBC模型中的Tregs的缺陷出现在什么范畴；第二、小鼠PBC模型中的Tregs在疾病进程中是否依然具有对过度免疫应答的抑制能力,即Tregs究竟扮演积极亦或消极的作用；第三、将小鼠PBC模型中的CD4+T细胞置换为正常的CD4+T细胞是否足以逆转胆管炎症的发生。首先,使用高分辨率的微阵列技术,配合定量PCR和流式细胞术对结果的严格确认,我们发现dnTGF-βRⅡ来源的Tregs同正常小鼠来源的Tregs之问存在广泛差别。重要的转录因子Eos、Ahr、Klf2、Foxp1在dnTGF-βRⅡTregs中显著下调。而且在Tregs功能方面,模型鼠Tregs表现出高度活化,甚至是促炎性的表型,譬如上调Ccl5、Granzyme B和IFN-γ。基因通路的分析暗示,初始的TGF-p信号的缺失可能是造成免疫调节功能下调的诱因。这些发现细致的描绘了模型鼠Tregs存在的遗传缺陷,并强调出一些需要在人类PBC研究中拓展研究的基因和信号通路。生物信息学层次提供的信息揭示了模型鼠Tregs所存在TGF-β信号依赖和非依赖的异常。随后,我们构建了CD4+T细胞缺陷,同样包含Tregs缺陷的dnTGFβRⅡ;CD4小鼠。与dnTGF-βRⅡ小鼠相比,dnTGFβRⅡ;CD4-/-小鼠出现了更为严重的胆管炎症。在CD4+T细胞缺陷的情况下,肝内浸润的淋巴细胞总数以及效应性CD8+T细胞的数量显著增加。这暗示dnTGFβRⅡ的Tregs对免疫系统依然具有负调作用。而体外共培养抑制实验的结果也表明dnTGF-βRⅡ的Tregs相对于WT的Tregs依然具有抑制功能,但是能力显著削弱。进一步,我们发现,如果使用dnTGFβRⅡ;CD4-/-和B6;CD8-/-小鼠的骨髓构建骨髓嵌合模型,在嵌合鼠中野生型CD4+T细胞回补的条件下,嵌合鼠的胆管炎症明显减轻。我们还使用了连体共生的手段,构建了dnTGFβRⅡ;CD4-/-小鼠与野生型小鼠的血液嵌合模型,得到了同骨髓嵌合模型相似的结果。这些结果表明,在致病性的CD8+T细胞依然存在的情况下,纠正CD4+T细胞所出现的缺陷就足以消除疾病的主要特征,因此针对CD4+T细胞的靶向治疗也许能够有效的治疗PBC疾病。