纳豆(natto)在日本是一种历史悠久的传统食品,系由蒸煮后的大豆接种纳豆芽孢杆菌发酵制得。纳豆激酶(nattokinase, NK)是在纳豆芽孢杆菌发酵过程中产生的一种具有强烈纤溶活性的碱性丝氨酸蛋白酶。纳豆激酶具有纤溶作用强,药效时间长,可通过静脉与口服两种途径给药以及不引起出血的副作用等第一代溶栓药物所不具备的优点,使其具有开发成新一代溶栓药的潜力。本研究从五种日本纳豆中分离、筛选出一株产酶活力最高的纳豆芽孢杆菌菌株NT2,并以该菌株基因组DNA 为模板PCR 扩增出编码纳豆激酶酶原即包括前导肽、成熟肽的核苷酸序列,并克隆到pGEM-T载体,以原核表达载体pKK223-3构建了重组表达载体pKK-pro-NK,转化大肠杆菌JM105,经IPTG 诱导表达。表达的纳豆激酶酶原一部分通过自体加工机制切除了前导肽成为成熟肽。纳豆激酶酶原主要分布在超声破菌后的沉淀,纳豆激酶成熟肽50%分布在菌体破碎后的上清中,纤维蛋白平板检测上清具有明显的纤溶活性而沉淀则无活性。表达产物活性测定显示1ml 菌液产生尿激酶活力单位数约为60U。