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背景与目的对于接受过治疗的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者后续治疗指南认为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)和化疗均可选择。但EGFR野生型(EGFR WT) NSCLC患者的二线治疗中EGFR TKI是否和化疗具有同样的有效性尚待进一步证实。本研究第一章拟通过回顾性研究分析对该类患者二线治疗化疗和靶向治疗疗效及安全性进行比较。间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)基因重排阳性非小细胞肺癌是肺癌中新的分子亚型,ALK酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors, TKIs)对ALK阳性肺癌具有较好疗效,因此ALK融合基因检测具有重要意义。本研究第二章拟构建一种新的实时荧光定量qRT—PCR (real time quantitative reverse transcriptase—polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测方法对使用福尔马林固定石蜡包埋的方法处理(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded,FFPE)的样品EML4-ALK融合基因进行检测,并以荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)检测方法为参照标准进行验证。方法收集北京协和医院2009年5月至2014年5月在北京协和医院住院或门诊治疗病理确诊为晚期非小细胞肺癌患者。入组条件：第七版TNM分期为Ⅳ期或无法接受根治性治疗的ⅢB期非小细胞肺癌；EGFR基因为野生型；二线或以上治疗。随访时间截止至2014年5月。生存分析采用Kaplan-Meier法,单因素生存时间差异采用Log-Rank法；多因素分析采用Cox比例风险模型(性别、年龄、病理类型、吸烟状态、疗效、药物类型等)；组间、组内比较采用χ2检验,检验水准确定P<0.05为有统计学差异(Cox比例风险模型中P<0.1)。构建qRT-PCR检测体系对53例肺癌患者组织标本中的EML4-ALK融合基因情况进行检测,并以FISH法为参照标准采用SPSS21.0软件验证两种方法的一致性。结果63例EGFR野生型晚期非小细胞肺癌患者,靶向组(20例)和化疗组(43例)中位无进展生存期分别为2.6月和5.2月(P=0.069);1年生存率分别为35%和49%(P=0.304)；疾病控制率分别为40%和67%(P=0.039)；中位总生存期分别为8.5月和14.4月(P=0.48)；总体不良反应发生率无统计学差异(40%vs42%,P=0.889),靶向组无3级以上不良反应。53例肺癌患者FFPE标本中除1例RNA提取失败外余下52例标本中,构建的qRT-PCR体系检测出2例EML4-ALK融合基因阳性,50例阴性,与FISH检测结果完全一致。结论EGFR野生型晚期NSCLC患者二线采用化疗较靶向治疗PFS具有一定优势(5.2VS2.6月,P=0.069),但1年生存率、OS无显著差异。与化疗相比,靶向治疗不良反应轻微。构建的qRT-PCR体系可检测FFPE样本,与FISH法一致性好,是一种简便、可靠、经济的EML4-ALK融合基因检测手段。