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目的：通过探讨Irx5b基因在野生型斑马鱼及HoxB4高表达转基因斑马鱼中的表达情况,观察其对胚胎期造血发育的影响,从而研究Irx5b基因作为HoxB4可能下游靶基因在斑马鱼胚胎期造血干细胞发育中的功能。 方法：构建Irx5b-pCS2+重组质粒,验证其正确性后,制备Irx5b基因反义mRNA探针,通过原位杂交检测Irx5b基因在空白对照组(野生型斑马鱼,Tuebingen)、实验组(HoxB4转基因斑马鱼,zLmo2-LDEL-HoxB4-EGFP×zLmo2-Cre)及实验对照组(EGFP转基因斑马鱼,zLmo2-LDEL-EGFP×zLmo2-Cre)中的表达情况。观察Irx5b基因在野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中表达情况,以及HoxB4基因高表达时对Irx5b基因表达的影响。应用实时荧光定量PCR反应检测Irx5b基因mRNA在实验对照组及实验组中的表达水平。 结果：成功构建Irx5b-pCS2+重组质粒,通过原位杂交显示:Irx5b基因在野生型斑马鱼受精后(hourspostfertilized,hpf)12-72均有表达,具体表达情况如下:12hpf的后脑,18hpf的后脑、原肾管及表皮血管网,24hpf的后脑、中脑、原肾管、表皮血管网及后部血岛(posteriorbloodisland,PBI),30-36hpf的后脑、中脑、原肾管、表皮血管网及PBI,48-72hpf后脑、中脑有信号表达。通过比较Irx5b基因在空白对照组、实验对照组及实验组中信号表达发现:24-36hpf时在实验组原肾管及后部血岛的表达均较其他两组明显增强,18、48及72hpf在三个组中信号表达无明显差异。实时荧光定量PCR实验显示:在24、30及36hpf斑马鱼胚胎中实验组Irx5b基因mRNA的表达水平较实验对照组高,并且差异具有统计学意义。 结论：在野生型斑马鱼造血系统中Irx5b基因表达量较低,但是高表达HoxB4基因的转基因斑马鱼中,24、30及36hpf的胚胎造血区域Irx5b基因表达增强,结合实时荧光定量PCR实验结果,推测在斑马鱼胚胎造血发育过程中Irx5b基因作为HoxB4可能的下游靶基因共同参与造血干细胞的增殖过程。