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猪流行性腹泻病(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪的一种急性高度接触性胃肠道疾病。其临床特点为急性呕吐和严重腹泻,可导致新生仔猪的高死亡率。世界各地区PED广泛流行,经济损失影响重大。M蛋白是PEDV主要结构蛋白之一,具有高度保守性,是PEDV刺激机体产生免疫保护的重要蛋白之一,决定病毒粒子的装配位点、病毒成熟及出芽位点。另外,抗M蛋白抗体在补体存在的情况下可中和病毒感染活性。所以M蛋白特性研究对揭示PEDV感染机制及该病的综合防治有重要的意义。本研究成功构建PEDV M蛋白的阳性重组质粒pET-32a-PEDV-M,将其在大肠杆菌表达系统中进行诱导表达,融合蛋白大小约为41 kμ,与预期大小相符。以纯化复性的M蛋白为免疫原免疫大白兔,制备兔抗多克隆抗体,通过间接ELISA测定多抗效价达到105,免疫印迹(Western Blot)和间接免疫荧光(IFA)表明其与PEDV具有很好的抗原抗体反应性。以表达纯化复性后的M蛋白作为靶蛋白,利用噬菌体展示随机十二肽库进行筛选,4轮淘选后,挑选10个与PEDV M蛋白特异性结合力高的噬菌体单克隆,序列测定并推导其氨基酸序列为AGWYCTEVLCV、AYCTRHVCYLDN,命名为M-2、M-9多肽。合成多肽的体外抗病毒试验中,间接免疫荧光和实时荧光定量PCR实验证明M-2、M-9及M-2与M-9多肽联合与PEDV作用都能够有效抑制病毒的复制,且都呈剂量依赖性。其中M-2多肽抑制病毒作用比M-9多肽高,两种多肽联合抗病毒作用最好。综上,本文为进一步研究PEDV以及M蛋白功能性配体,为今后PEDV防治及小分子治疗制剂的研发提供了理论基础和试验依据。