伏马毒素B和葡萄球菌肠毒素A、B的免疫芯片检测技术研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院   | 被引量 : 0次 | 上传用户:bbxxxb
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免疫芯片是蛋白质芯片的一种,是指固定于支持介质上的蛋白质构成的微阵列。该技术与传统的检测方法相比,有着一定的优越性,因此,日益受到人们的青睐。该研究是以伏马毒素B<,1>、葡萄球菌肠毒素A、B为检测对象,建立了用于伏马毒素B<,1>、葡萄球菌肠毒素A、B检测的免疫芯片的技术方法。 本研究先将抗原或抗体固定在醛基化玻片表面,利用经戊二醛等试剂处理过的表面带有醛基的玻璃片作为载体,通过载体表面的醛基与抗原或抗体的游离氨基的结合实现抗原或抗体的固定。 在检测伏马毒素B<,1>时采用抗体竞争法。检测时将待测物伏马毒素B<,1>与一定量的Cv3标记的伏马毒素B<,1>-牛血清白蛋白同时加到玻片上。待测物伏马毒素B<,1>与标记的伏马毒素B<,1>-牛血清白蛋白竞争结合玻璃片上固定的抗体。由于标记物是定量的,当待测物浓度越高则结合上的伏马毒素B<,1>越多,而结合上的标记物就越少,从而荧光信号强度就越弱。反之,荧光信号就越强,从而实现了待测物的测定。最低检测浓度为1 ug/ml的伏马毒素B<,1>。 在检测葡萄球菌肠毒素A、B时采用双抗体夹心法。对影响免疫芯片检测结果的实验条件进行了优化,检测时将SEA、SEB加入反应池中,反应后清洗掉未结合的SE,再加入相应的标记抗体,形成固定抗体-待测物-标记抗体的央心式结构。当待测物越多时,结合上的抗原就多,相应结合上的标记抗体也越多,产生的荧光信号也越强,荧光信号强度随待测物浓度的增加而增加,当浓度高于一定值时,荧光信号强度趋于一定值。按优化后的条件检测SEA、SEB,最低均可检测1ng/ml的样品。并实现了在同一张芯片上同时检测葡萄球菌肠毒素A、B,灵敏度较高。 随着蛋白质芯片各项技术的进步与成熟,免疫芯片技术正成为食品安全快速检测中主要发展方向和非常重要的检测手段之一。可以预见这一高新技术将应用于更广的领域。
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