核桃壳提取物的成分分析及其抗氧化活性研究

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本实验以核桃的最外层果壳为原料,用乙醇和氯仿对其进行浸提浓缩,得到的浸提物分别进行体外和体内抗氧化活性研究,并对浸提物中胡桃醌的提取工艺和含量及其他各化学成分进行了测定分析。试验结果如下:1.核桃壳中胡桃醌的提取工艺:将核桃壳粉碎用乙醇浸提,以胡桃醌得率为指标考察冷浸法、热回流法、超声法对核桃壳中胡桃醌含量的影响,最终确定最适提取方法为超声法。进而采用响应面分析方法,通过二次回归设计得到了胡桃醌超声波提取率与超声温度、超声时间、超声功率、液料比关系的回归模型。利用模型的等高线及其响应面,对影响胡桃醌超声提取的主要因素及其相互作用进行探讨,得到的优化参数为温度45℃,时间1.4h,功率250W,料液比1:24,胡桃醌平均得率8.1503%。2核桃壳中活性成分分析:高效液相色谱法测定核桃壳中胡桃醌,其色谱条件为:ODS-C18(250mmx4.6mm i.d.,5μm)色谱柱,柱温30℃;SPD210A紫外检测器,检测波长261nm;流动相为V(甲醇):V(水)=55:45,流速0.8mL/min;进样量10μL.高效液相色谱法测定结果对比胡桃醌标准品,得出:核桃壳提取物的乙醇相和氯仿相中都含有胡桃醌,且核桃壳氯仿提物中胡桃醌含量稍高于乙醇相。采用气-质联用技术,对核桃壳提取物的乙醇相和氯仿相的的化学组成和活性成分进行分析。核桃壳提取物的乙醇相和氯仿相中都有的主要活性成分为油酸(oleic Acid),十八烷酸(hexadecanoic acid),5-羟基-1,4-萘醌(5-hydroxy-1,4-naphthaoquinon)。3核桃壳提取物的体外抗氧化实验:高浓度的核桃壳提取物具有还原力,核桃壳提取物对DPPH·自由基和O2-·自由基的清除能力较强,对·OH自由基、H202也具有一定的清除能力,但在实验浓度范围内清除能力不明显。总体来说,核桃壳氯仿相对02-"、·OH自由基、H2O2的清除能力高于乙醇相,但对还原能力的测定就稍低于乙醇相。当样品浓度为2mg/mL时,核桃壳乙醇浸出物对DPPH·自由基和02-·清除达84.91%和80.36%,还原力达到1.971;在相同样品浓度时,核桃壳氯仿浸出物对DPPH·自由基和O2-·清除可达93.42%和90.64%,还原力达到0.998,清除力较强,抗氧化作用明显,而且核桃壳乙醇相和氯仿相对DPPH·自由基、O2-·自由基的清除能力和还原能力与样品的浓度成正相关。4核桃壳提取物的体内抗氧化实验:各指标中空白组和对照组无显著差异(p>0.05),说明微量乙醇对小鼠无害。核桃壳醇提物具有明显清除小鼠肝脏、肾脏、心脏、血清中MDA的含量和显著提高小鼠肝脏、肾脏、心脏、血清中T-AOC能力、SOD活性、GSH-Px活性和CAT的活性,并且都呈量效关系。
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