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[目的]微小RNA (microRNA, miRNA)是一类小分子非编码单链RNA,它可通过碱基互补配对的方式与靶mRNA特异性结合,最终导致靶mRNA的降解或转录后抑制,从而有效沉默靶mRNA的表达。(?)miRNA通过上述机制调控多种癌基因或抑癌基因的表达,故其表达异常与肿瘤的发生发展密切相关。近来的研究初步证实,miR-218是一种抑癌miRNA (Tumour suppressing miRNA, TS-miRNA)。已知在多种恶性肿瘤(如胃癌、乳腺癌)中miR-218表达异常减少导致的相应靶癌基因表达异常增加,在肿瘤细胞无限增殖、凋亡抑制、肿瘤间质血管生成及侵袭和转移等方面发挥了重要作用。生物信息学分析显示,细胞周期蛋白依赖性激酶6(Cyclin-dependent kinase, CDK6)的mRNA是miR-218的靶mRNA。CDK6是重要的细胞周期调控因子,它通过促使增殖期细胞由G1期进入S期而发挥促增殖作用。然而,胶质瘤细胞中miR-218及CDK6表达状况怎样,二者表达变化的相互关系及其在胶质瘤发生、发展中有何作用,miR-218对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响如何,均尚不清楚。本研究旨在对上述间题进行深入系统的探讨。[方法]①本研究采用组织微阵列、锁定寡核苷酸探针原位杂交及免疫组织化学方法,检测60例不同级别胶质瘤组织标本及10例对照脑组织中miR-218、CDK6及Ki-67抗原的表达状况,并分析三者之间的相互关系；②以恶性胶质母细胞瘤细胞系U87MG为研究对象,将U87MG细胞分为转染miRNA阴性对照序列(对照组)和miR-218 mimics (mimics组)两组；③采用qRT-PCR技术检测两组U87MG细胞中miR-218的含量；④采用免疫细胞化学染色方法检测两组U87MG细胞中CDK6及Ki-67的表达状况；⑤利用单细胞凝胶电泳技术检测两组U87MG细胞的凋亡程度；⑥利用MTT实验观察miR-218对U87MG细胞生长的影响。[结果]①锁定寡核苷酸探针原位杂交检测结果显示：对照组脑组织及Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组的miR-218阳性标记指数(LI%)分别为22.45±0.59、4.00±1.07、1.87±1.06、0.94±±0.78,四组间的差异均有统计学意义(P<0.05～0.001)。②免疫组织化学检测结果显示：以上四组的CDK6 LI%分别为7.25±1.20、16.71±0.80、24.43±0.62、32.05±0.43,对照组与各胶质瘤组间及Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组与Ⅳ级胶质瘤组间的差异有统计学意义(P<0.01～0.001)；以上四组的Ki-67阳性细胞密度分别为0.0-0.00、9.30±3.48、31.15±9.44、60.15±13.60(x±s/0.05mm2),四组间间间的差异均有统计学意义(P<0.01)。③直线相关性分析显示：miR-218 LI%与CDK6 LI%及Ki-67阳性细胞密度间均呈显著性负相关(r=-0.480～-0.534,P<0.01),后两者间呈显著性正相关(r=0.530,P<0.01)。④qRT-PCR检测结果显示：转染miR-218 mimics组U87MG细胞中miR-218含量显著高于对照组U87MG细胞,差异有统计学意义(P<0.001)；免疫细胞化学检测结果显示：mimics组U87MG细胞的CDK6及Ki-67 LI%(14.74±1.19、30.88±3.31)均明显低于对照组U87MG细胞(79.06±2.07、64.94±3.96),差异均有统计学意义(P<0.001)。⑤单细胞凝胶电泳检测结果显示：mimics组及对照组U87MG细胞的凋亡指数(AI%)分别为68.44±7.05、13.04±0.97,两组间差异有统计学意义(P<0.001)。⑥MTT检测结果显示：mimics组及对照组U87MG细胞在24h、48h、72h和96h时的相对吸光度值分别为0.64±0.02、0.72±0.08、1.35±0.28、1.63±0.14和0.67±0.06、1.23±0.14、1.91±0.04、2.19±0.22；自转染48小时后,各时间点mimics组U87MG细胞的存活数明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05-0.001)。[结论]①在胶质瘤细胞中普遍存在miR-218表达异常减少和CDK6表达异常增加,二者的表达水平对评价胶质瘤良恶性程度有重要参考价值；②miR-218表达异常减少可导致胶质瘤细胞CDK6表达及增殖活性增强；③补充外源性miR-218可有效下调恶胶质瘤细胞CDK6表达、抑制其增殖和促进其凋亡,故在恶性胶质瘤基因治疗中具有重要的潜在应用价值。