三甲基氯化锡致雏鸡和LMH细胞氧化损伤的初步研究

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有机锡化合物广泛用于工业和农业生产中,在环境中难以降解,可直接或间接引起中毒,也可通过生物富集到动物性食品中,给动物和人类健康造成不同程度危害。三甲基氯化锡(Trimethyltin chloride TMT)是塑料生产中常见的有机锡化合物,具有较高的脂溶性和水溶性,可通过呼吸道、消化道和皮肤黏膜等途径进入体内,对机体各器官造成损伤。动物饲料成分来源广泛,容易受到环境毒物的污染,因此本文以雏鸡和体外培养的肝LMH细胞为研究对象,初步探究三甲基氯化锡染毒后导致雏鸡和LMH细胞的氧化损伤,为TMT的毒性研究提供理论基础。本研究采用TMT染毒2日龄雏鸡,染毒剂量为2、4和8mg/kg,观察TMT染毒后雏鸡的临床症状和肝脏组织病理变化,检测雏鸡血清生化指标、肝脏功能相关酶活力和肝脏组织凋亡相关基因的表达,以探究TMT对雏鸡的影响。结果表明,TMT染毒组雏鸡出现抽搐、精神委顿、食欲废绝和蹲伏等临床症状,在8mg/kg组全部发生死亡,显微镜下观察肝脏出现不同程度变性和坏死,尤其在4和8mg/kg染毒组雏鸡肝脏分别出现局灶性坏死灶和弥漫性细胞坏死。血清生化检查发现染毒后雏鸡血清白蛋白、球蛋白、总蛋白、天门冬氨酸氨基转移酶、淀粉酶及肌酸激酶出现剂量依赖性增高。8mg/kg染毒组血清丙氨酸氨基转移酶活性、总胆红素、甘油三酯及无机磷含量显著增高,肌酐和葡萄糖含量显著下降。同时雏鸡肝脏、脑组织和血清的GSH含量下降,AST和ALT含量增加。q PCR检测发现肝脏中凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9 m RNA相对表达量显著增高,其中2mg/kg和4mg/kg TMT呈剂量依赖性上调。结果表明,TMT可导致雏鸡肝脏氧化损伤和细胞坏死,可能同时诱导肝细胞凋亡发生。采用0.5、1、5和10μg/m L TMT染毒LMH细胞,观察TMT对LMH细胞的氧化指标、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果显示,不同浓度TMT染毒LMH细胞12h后,CCK8法检测发现各染毒组细胞活力均出现下降,其中10μg/m LTMT组下降最显著。显微镜下观察到TMT染毒后细胞形态变细长,在5μg/m L TMT组出现皱缩变圆,10μg/m L TMT组大量细胞变圆且漂浮在液体中。氧化损伤指标检测结果表明,TMT导致LMH细胞的GSH和SOD含量减少,MDA、AST和ALT的含量增加。流式检测结果显示,TMT染毒后LMH细胞G1期往S期发展,在G2/M期被抑制,促使细胞周期终止,细胞晚期凋亡率明显增加。q PCR检测凋亡相关基因的变化结果表明,TMT染毒后LMH细胞Caspase-3、Caspase-8、Bax和Bcl-2 m RNA相对表达量出现上调。结果表明TMT能促使体外培养LMH细胞氧化损伤,抑制LMH细胞增殖,诱导LMH细胞凋亡。
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