论文部分内容阅读
木霉属真菌Trichoderma sp.Xy24为从海南三亚红树林木果楝(Xylocarpus granatum)植物中分离得到的一株内生真菌,前期研究发现该菌株的菌液乙酸乙酯提取物具有良好的细胞毒活性。从10 L发酵液乙酸乙酯提取物中分离得到了4个已知化合物：1个木霉特征性Harziane型二萜Harzianone (1)、1个菖蒲烷型倍半萜Trichoacorenol (2)、2个聚酮类化合物Trichodimerol (3)和Trichocage B (4),其中化合物1为一极其罕见的Harziane型二萜类化合物,化合物3具有中等程度的抗病毒活性。为寻找活性化合物及更多结构新颖的萜类化合物,本研究对该菌株进行了60 L的放大发酵培养,以寻找萜类化合物为重点,在HPLC-UV/MSn导向下进行定向分离纯化,共得到9个化合物(化合物5-13),分别为：1α-isopropyl-4α,8-dimethylspiro[4.5]dec-8-ene-2β,7a-di-ol (5) lα-isopropyl-4α,8-dimethyl-spiro[4.5]dec-8-ene-3β,7α-diol (6)、 Cyclonerodiol (7)、10,11-dihydroxy-cyclonerodiol (8)、14-hydroxy-trichoacorenol (9). (9R,10R)-dihydro-harzianone (10)、麦角甾醇(11)、Ergokonin B (12)、十八烷酸甲酯(13),其中化合物5-9为倍半萜类化合物,10为Harziane型二萜类化合物,11及12为甾醇类化合物,13为脂肪酸酯类化合物,化合物8-10为新化合物。在Trichoderma sp. Xy24的放大培养过程中,发现了生长状态异常的菌株,其代谢产物的HPLC分析发现了一组新的色谱峰,结合HPLC-UV和HPLC-MSn分析,初步确定它们为木霉代谢产物Harzianone的结构类似物。由此推测,异常生长的菌株可能被其它微生物污染,而这些微生物对木霉的代谢产物Harzianone进行生物转化导致这些新增化合物的产生。随后从生长异常的菌液中分离并鉴定了一株芽孢杆菌,利用该菌对Harzianone进行生物转化证实了上述推测,获得了9个转化产物(化合物14-22),经高分辨质谱、1D NMR、2D NMR等波谱方法确定了其结构：4β-hydroxy-harzianone (14), 2α-hydroxy-harzianone (15),2α,17-dihydroxy-harzianone (16),3α-hydroxy-3β,17-epoxy--harzianone (17),3β,17-epoxy—harzianone (18), Harzianone acid (19),3β,4β-dihydroxy-harzianone (20),2α,3β-dihydroxy-harzianone (21), Harziandione (22), 化合物14-21为新 Harziane型二萜类化合物。比较分析底物、转化产物的结构,对该生物转化途径进行了合理的推测,涉及的反应包括羟基化、氧化、脱水及分子内的缩醛化等反应,该研究丰富了Harziane型二萜类化合物的结构类型。