【摘 要】
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Thomsen-Friedenreich(TF)抗原一种典型的肿瘤相关糖抗原(tumor associated carbohydrate antigens,TACAs),其在乳腺癌、胰腺癌等大多数癌症细胞表面大量存在,并成为标志物。TF抗原在激活免疫系统中起到重要作用,经常被用到肿瘤免疫治疗中。疫苗使用过程中,为了激活、或增强机体的免疫系统,经常需要加入佐剂,与抗原配伍免疫机体,起到增强疫苗免疫效
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Thomsen-Friedenreich(TF)抗原一种典型的肿瘤相关糖抗原(tumor associated carbohydrate antigens,TACAs),其在乳腺癌、胰腺癌等大多数癌症细胞表面大量存在,并成为标志物。TF抗原在激活免疫系统中起到重要作用,经常被用到肿瘤免疫治疗中。疫苗使用过程中,为了激活、或增强机体的免疫系统,经常需要加入佐剂,与抗原配伍免疫机体,起到增强疫苗免疫效果的作用。壳寡糖(Chitosan olgosaccharides,COS),又称壳聚寡糖或低聚壳聚糖,是寡糖是自然界中唯一带正电荷阳离子碱性氨基低聚糖。COS易溶于水、粘性低,具有较好的生物相容性,同时具有辅助抗原增强免疫刺激、限制肿瘤细胞的转移和逃逸等多种生物活性。另外,据研究发现,只有向抗原呈递细胞(APC)同时呈递抗原和佐剂,才能有效激活T细胞,充分发挥疫苗的免疫激活效果。基于此,本课题选用壳寡糖作为疫苗佐剂。设计了一种基于TF(ThomsenFriedenreich)抗原和壳寡糖作为内源性佐剂的肿瘤疫苗。具体为,首先,以半乳糖氨基盐酸盐为原料,经10步化学合成反应步骤,以9.8%的总收率高效合成TF二糖砌块;其次,将TF糖基与CRM197载体蛋白共价偶联,制备出肿瘤疫苗的抗原部分TFCRM197,最后,将糖蛋白TF-CRM197与巯基活化后的壳寡糖佐剂进行共价结合,得到目标肿瘤疫苗TF-CRM197-COS。同时制备出TF-BSA糖蛋白作为抗原包被底物。经MALDI-TOF对结合物分子量测定,TF-CRM197糖蛋白中每个蛋白分子上共价结合了7.2个TF抗原。通过实施免疫流程,进行疫苗的动物水平免疫学评价。对6~8周龄的雌性Balb/c小鼠进行免疫,测定小鼠血清的抗体滴度水平。结果表明,本课题设计的TF-CRM197-COS组能产生出较高滴度IgG抗体水平(数值为25600)。TF-CRM197-COS组与抗原/佐剂物理混合组或佐剂组相比,抗体滴度水平具有显著性差异,显示出更优的免疫刺激效果。综上,本文制备的TF-CRM197-COS肿瘤疫苗将TF抗原与壳寡糖佐剂共载,用于疫苗的递送,具有较高的免疫原性和递送效率,显示出较好的应用潜力。
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