【摘 要】
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布鲁菌病是全球重大的人兽共患病,近年来我国布鲁菌病呈上升趋势,给我国经济造成了巨大损失。本研究通过分析羊种布鲁菌Rev.I株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性,对eryA基因进行生物信息学分析及原核表达和单克隆抗体的制备。结果表明,本试验成功克隆并表达了 eryA基因;经Western-Blot检测,表达蛋白可与标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;生物信息学分析显示,该蛋白没有跨膜
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布鲁菌病是全球重大的人兽共患病,近年来我国布鲁菌病呈上升趋势,给我国经济造成了巨大损失。本研究通过分析羊种布鲁菌Rev.I株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性,对eryA基因进行生物信息学分析及原核表达和单克隆抗体的制备。结果表明,本试验成功克隆并表达了 eryA基因;经Western-Blot检测,表达蛋白可与标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;生物信息学分析显示,该蛋白没有跨膜区结构,无信号肽,二级结构中α-螺旋比重最大;抗原表位分析显示,该蛋白含有较多的抗原决定簇。用纯化的蛋白免疫小鼠后采取小鼠脾细胞进行融合后筛选出分泌IgG抗体的杂交瘤细胞,经扩大培养后对小鼠进行腹腔注射,收集腹水并纯化,纯化后的抗体经BCA方法测定及SDS-PAGE检测发现得到高纯度的抗体。通过对eryA基因的研究,为布病检测方法的建立奠定基础。
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