去卵巢大鼠海马和额叶皮层HCNP的变化及中枢胆碱能神经系统相关基因表达的变化

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lizhuyundao
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目的观察雌激素缺乏对大鼠海马CA1/CA2区和额叶皮层HCNP的含量和ChAT、M1 AChR、α7 nAChR及NMDA受体亚单位NR1基因表达的影响。方法1实验动物分组将4月龄雌性SD大鼠30只随机分为3组:假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢给予苯甲酸雌二醇组(OVX+EB组),每组10只。Sham组为双侧去除少量卵巢上脂肪组织;OVX组为去除双侧卵巢;OVX+EB组为去卵巢手术10天后给予苯甲酸雌二醇皮下注射,100μg/kg,隔日一次。手术后常规喂养4个月。2组织标本的获取及指标测定麻醉大鼠,开颅并迅速分离海马背侧组织和额叶皮层置于液氮中,于-80℃低温冰箱保存,用于组织蛋白和组织总RNA的提取。分离大鼠子宫并进行称重。2.1蛋白测定提取海马背侧组织蛋白及额叶皮层组织蛋白并用Bradford法测定蛋白含量,以每毫升样品中的毫克蛋白量(mg/ml)表示。β-actin作为HCNPpp的内参照,用western-blotting法测定大鼠海马C-HCNPpp和N-HCNPpp的相对含量。2.2 mRNA表达的测定用Trizol法提取海马背侧组织和额叶皮层组织总RNA。用β-actin作为内参照,RT-PCR法测定海马背侧组织和额叶皮层HCNPpp mRNA、ChAT mRNA、NR1 mRNA、M1 AChR mRNA及α7 nAChR mRNA的相对表达量。结果1大鼠子宫重量变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组大鼠子宫重量明显降低(P<0.01),而Sham组和OVX+EB组大鼠子宫重量无差别。2大鼠海马HCNPpp相对含量的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组C-HCNPpp的相对含量明显升高(P<0.05),而Sham组和OVX+EB组之间无差别(P>0.05)。但三组之间N-HCNPpp的相对含量的差别无统计学意义。3大鼠皮层HCNPpp相对含量的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组C-HCNPpp的相对含量明显升高(P<0.05),而Sham组和OVX+EB组之间无差别(P>0.05)。但三组之间N-HCNPpp的相对含量的差别无统计学意义。4大鼠海马HCNPpp mRNA表达水平的变化与Sham组比较,OVX组和OVX+EB组HCNPpp mRNA的相对表达量的无显著性差别(P>0.05);与OVX组比较,OVX+EB组HCNPpp mRNA的相对表达量升高(P<0.05)。5大鼠皮层HCNPpp mRNA表达水平的变化Sham组、OVX组和OVX+EB组之间的HCNPpp mRNA的相对表达量无显著性差异(P>0.05)。6大鼠海马ChAT mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组ChAT mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05),而Sham组与OVX+EB组之间无差别(P>0.05)。7大鼠皮层ChAT mRNA表达水平的变化Sham组、OVX组和OVX+EB组之间的ChAT mRNA的相对表达量无显著性差异(P>0.05)。8大鼠海马M1 AChR mRNA表达水平的变化与Sham组比较,OVX组M1 AChR mRNA相对表达量明显升高(P<0.05),OVX+EB组M1 AChR mRNA相对表达量明显升高(P<0.01),而OVX组和OVX+EB组无差别(P>0.05)。9大鼠皮层M1 AChR mRNA表达水平的变化Sham组、OVX组和OVX+EB组,三组之间的M1 AChR mRNA的相对表达量无显著性差异(P>0.05)。10大鼠海马α7 nAChR mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组α7 nAChR mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),而Sham组和OVX+EB组无差别(P>0.05)。11大鼠皮层α7 nAChR mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组α7 nAChR mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),而Sham组和OVX+EB组无差别(P>0.05)。12大鼠海马NR1 mRNA表达水平的变化与Sham和OVX+EB组相比,OVX组NR1 mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),而Sham组和OVX+EB组无差别(P>0.05)。13大鼠皮层NR1 mRNA表达水平的变化Sham组、OVX组和OVX+EB组之间的NR1 mRNA的相对表达量无显著性差异(P>0.05)。结论1雌激素缺乏可导致大鼠海马CA1/CA2区及额叶皮层HCNP的增多。2雌激素缺乏可导致大鼠海马CA1/CA2区ChAT、α7 nAChR mRNA表达水平降低,此结果说明ChAT、α7 nAChR mRNA水平受雌激素的调控,可能是雌激素缺乏导致AD发生发展的分子机制之一。3雌激素缺乏可导致大鼠海马CA1/CA2区NR1 mRNA表达水平降低,此结果说明NR1 mRNA水平受雌激素的调控,可能是雌激素缺乏导致AD发生发展的分子机制之一。
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