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研究背景:骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是最常见的骨原发恶性肿瘤,其恶性程度高,好发于青少年,是对青少年健康威胁最大的恶性肿瘤之一。由于现行骨肉瘤诊断手段匮乏,绝大多数骨肉瘤患者诊断时已经进入肿瘤的中晚期。故临床急需能够准确对骨肉瘤进行诊断及分型的生物标记物。科学家们将长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)定义为一类转录长度超过200nt,缺乏编码蛋白的开放阅读框的RNA转录本。lncRNA几乎参与了机体所有的生命调节活动。lncRNA与肿瘤的发生、侵袭和转移等生物学行为有密切的联系,这些特征使得lncRNA具有作为肿瘤早期诊断和进展评价标志的潜力。课题组前期预实验使用8对骨肉瘤组织及其正常组织进行qRT-PCR检测发现lnc-RAB11B-AS1在骨肉瘤组织中低表达。因此本课题拟通过扩大样本量验证lnc-RAB11B-AS1在骨肉瘤组织中的表达情况,并通过过表达及干扰技术对其功能进行验证,以期揭示lnc-RAB11B-AS1在骨肉瘤发生发展过程中所起的作用,为骨肉瘤的诊断和治疗策略提供科学依据。目的:分析长链非编码RNA RAB11B-AS1在骨肉瘤中的表达模式、功能及其机制。方法:1、检测24例骨肉瘤组织及对应正常组织RAB11B-AS1的相对表达量,同时分析RAB11B-AS1表达量与骨肉瘤病例临床特征的关系。2、构建稳定过表达、低表达RAB11B-AS1的骨肉瘤细胞系HOS、U20S;利用CCK-8细胞增殖实验鉴定RAB11B-AS1对骨肉瘤细胞增殖能力的影响;利用流式细胞仪分析R4B11B-AS1对骨肉瘤细胞周期和凋亡的影响;利用Transwell Migration及Invasion实验分析RAB11B-AS1对骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;利用裸鼠成瘤实验分析RAB11B-AS1对骨肉瘤细胞体内增殖能力进行分析;用顺铂处理不同组细胞,分析RAB11B-AS1对骨肉瘤细胞药物敏感性的影响。3、运用荧光素酶报告基因检测RAB11B-AS1与预测的靶基因RAB11B之间的关系,并在组织和蛋白质水平上验证;运用拯救实验,再次验证RAB11B-AS1与RAB11B的关系;运用MassArray甲基化检测,分析lnc-RAB11B-AS1在骨肉瘤中低表达的上游机制。4、运用小干扰RNA瞬时转染RAB11B后,利用CCK-8细胞增殖实验鉴定RAB11B对骨肉瘤细胞增殖能力的影响;利用流式细胞仪分析RAB11B对骨肉瘤细胞周期和凋亡的影响;运用组织芯片检测RAB11B对骨肉瘤的影响。结论:1、RAB11B-AS1在骨肉瘤组织中低表达;RAB11B-AS1低表达能明显促进骨肉瘤的临床进展。2、RAB11B-AS1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭有抑制作用,还可以增加骨肉瘤细胞对顺铂的敏感性。3、RAB11B在骨肉瘤组织中高表达,能够促进骨肉瘤细胞增殖;RAB11B高表达与骨肉瘤的分化程度、临床进展密切相关。4、RAB11B-AS1与RAB11B的表达成负相关,并通过RAB11B影响骨肉瘤细胞的恶性行为。5、RAB11B-AS1的启动子区高甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。研究总结:lnc-RAB11B-AS1启动子区高甲基化导致其在骨肉瘤组织中低表达,并通过介导RAB11B基因高表达,促进骨肉瘤患者临床进展。提示lnc-RAB11B-AS1可作为骨肉瘤评价进展和预后的生物标记物。