染色质免疫沉淀技术筛选转录因子AP-2靶基因

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在后基因组时代,DNA-蛋白质的相互作用是研究基因表达调控的一个重要领域。染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitationassay,简称ChIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。转录因子通过对细胞内外刺激作出反应调节基因的表达,它们常常通过控制基因转录的基本机制在决定细胞的命运中起主要的作用。转录因子AP-2就在许多参与哺乳动物发育、分化和癌症形成的基因转录调节中起到了重要的作用。为了鉴定AP-2转录因子所调节的下游靶基因,对与ChIP有关的实验条件进行了优化,获得了较优的实验条件,并运用ChIP实验在乳腺癌细胞系MDA-MB-453、宮颈癌细胞系HeLa和小鼠胚胎中来筛选和鉴定AP-2转录因子的结合位点。通过对这些AP-2-ChIP来源的DNA片段的细胞克隆和测序发现了新的AP-2转录因子的潜在的靶基因,这些靶基因在调节癌症的形成,细胞新陈代谢等方面起着相应的生物学功能。已有报道表明ErbB2基因是AP-2转录因子的下游靶基因,我们的实验结果与这一报道结果相一致。本研究运用ChIP实验筛选出了转录因子activator protein-2(AP-2)的下游靶基因,对于进一步研究AP-2的功能和调控网络打下了基础。
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