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高产蛋鸡卵泡发育的特征是具有组织良好的卵泡层次结构,卵泡选择是保障良好的卵泡层次结构的关键。在母鸡卵巢中,大约每天从直径约为6-8 mm的小黄卵泡中选择单个卵泡至排卵前卵泡,被称为卵泡选择。卵泡选择是决定卵泡发育和排卵的关键步骤。该过程与颗粒细胞层的分化和功能紧密相关,且颗粒细胞从未分化状态到分化状态是卵泡选择的关键。卵泡颗粒细胞的发育受多种激素和细胞因子的控制,包括促卵泡激素(FSH)和胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor 1,IGF1)。颗粒细胞对FSH产生响应被认为是卵泡选择的关键标志,而IGF1在颗粒细胞的增殖和分化中起关键作用。越来越多的研究表明,FSH和IGF1在调节颗粒细胞的增殖,凋亡和孕酮合成方面可能发挥着重要作用,但基本机制尚不清楚。为了研究FSH和IGF1影响颗粒细胞功能的机制,本试验对鸡小黄卵跑颗粒细胞培养体系进行优化,进一步筛选出处理颗粒细胞的最适FSH和IGF1浓度,从而研究FSH和IGF1对鸡卵泡选择过程中颗粒细胞增殖凋亡和孕酮合成的影响,为FSH和IGF1在鸡卵泡选择过程中的调控作用提供理论依据。1.鸡小黄卵泡颗粒细胞体外培养贴壁能力差且容易发生死亡,通过对预铺细胞外基质、选择血清来源、调整血清浓度等培养条件进行优化。最终确定以预铺鼠尾胶原作为胞外基质,并在培养基中添加5%鸡血清作为最适培养体系,使得鸡小黄卵泡颗粒细胞传代后仍能保证其增殖特性。2.为了确定FSH和IGF1处理鸡卵泡颗粒细胞的最适浓度,添加不同浓度的FSH(0,50,100 ng/m L)和IGF1(0,100,200 ng/m L)共同处理24 h后,利用Ed U检测FSH和IGF1处理后颗粒细胞的增殖情况。结果表明,200 ng/m L IGF1能够显著增加颗粒细胞增殖,而FSH对颗粒细胞增殖无显著影响,最终选择50 ng/m L FSH和200 ng/m L IGF1作为处理颗粒细胞的最适浓度。3.为了研究FSH和IGF1在鸡小黄卵泡颗粒细胞中的功能,添加50 ng/m L FSH和200 ng/m L IGF1处理分离培养的小黄卵泡颗粒细胞,利用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,通过q PCR检测颗粒细胞中增殖凋亡相关基因和孕酮合成相关基因的表达量。结果表明,IGF1促进颗粒细胞增殖,FSH和IGF1抑制颗粒细胞凋亡且抑制孕酮合成相关基因的表达。综上所述,IGF1能够促进颗粒细胞增殖,FSH和IGF1抑制颗粒细胞凋亡且抑制孕酮合成相关基因的表达。本研究结果有助于揭示FSH和IGF1对小黄卵泡颗粒细胞功能的影响,明确其在卵泡选择中的作用,为卵泡发育和卵泡选择的调控提供理论依据。