刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种以猫科动物为终宿主的肠道球虫,呈世界性分布,其中间宿主范围较广,可感染包括人类在内的多种动物,引起人兽共患的弓形虫病。一般情况下,弓形虫感染终宿主或中间宿主感染后往往不产生明显的临床症状,但是在宿主免疫功能低下时,可致严重后果。慢性弓形虫病患者或者免疫抑制(如器官移植后长期应用免疫抑制剂)、免疫缺陷患者(如AIDS)合并感染弓形虫往往可见肺炎、心肌炎、脉络膜视网膜炎以及多系统脏器衰竭的发生;孕妇孕期感染弓形虫可导致流产、早产、畸胎、死胎等。由于在临床上弓形虫病的症状表现多样,给诊断治疗及预防等带来许多的不便,且临床上尚无十分理想的治疗药物,因此寻找有效的预防与治疗措施,研制安全有效的疫苗显得极为迫切。DNA疫苗又称核酸疫苗,是继死疫苗、减毒或灭活疫苗、体外分离或基因工程制备的亚单位疫苗之后的又一类新型疫苗。大量的实验结果表明,DNA疫苗不仅具有预防疾病的作用,同时还具有治疗的作用。但是弓形虫生活史较复杂,抗原成分多,且具有发育阶段的特异性或差异性,因此成功的疫苗应针对多个特异性抗原,所产生的保护性免疫力需针对生活史中一个以上的感染阶段。动物和人体实验也表明,仅靠单种基因疫苗诱导的免疫效果并不理想,而复合基因疫苗诱导的各项免疫指标显著优于单价疫苗,有望成为未来基因疫苗中的研究方向。在本实验中,我们选用了SAG1和MIC8两种候选基因以构建复合DNA疫苗。SAG1(main surface antigen 1)是弓形虫速殖子期特异的主要表面抗原之一,能刺激机体产生IgG、IgM、IgA等高效价的抗体以及细胞因子IFN-γ等杀死虫体,具有高度的免疫原性和免疫保护性,是弓形虫感染免疫诊断和疫苗开发的的主要候选抗原。除此之外,它还与粘附和穿入宿主细胞等功能有关。MIC8(microneme protein 8)是一个单基因拷贝序列,无内含子,它所编码的蛋白是MIC3蛋白的护送蛋白,在速殖子期和缓殖子期都有表达,可帮助MIC3蛋白到达微线体并分泌出胞。最新研究显示,当MIC8蛋白不存在的时候,虫体不能与宿主细胞形成接触融合区域,使得侵入宿主细胞过程受阻,这种由MIC8参与形成的细胞融合区域非常重要,不可被其他的微线体蛋白来替代,从而表明MIC8是一种新颖的,功能独特的蛋白。另外,MIC8蛋白参与的信号级联放大反应,可致棒状体蛋白的分泌。本研究成功的将SAG1和MIC8两个基因构建在同一个表达载体pcDNA3.1上,通过肌注的方式免疫C57BL/6J小鼠,观察复合基因疫苗的免疫效果。结果表明SAG1-MIC8复合基因疫苗的效果显著优于SAG1或者MIC8单基因疫苗。此外,在小鼠体内没有检测到高浓度的细胞因子白介素4(IL-4),且各组间浓度差别无统计学意义,因而不能确定是否有Th2型免疫反应参与了免疫应答。