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人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)在自然界中广泛存在,属于疱疹病毒科的双链DNA病毒。研究表明,HCMV参与多种疾病的发生,尤其易造成免疫系统缺陷人群的感染以及胎儿的感染。由于HCMV感染所引发的严重疾病日益增加,学者开始致力于研究关于HCMV感染的防治工作。HCMV的药物治疗方法会产生较强的副作用,因此制备HCMV疫苗是当下防治HCMV最有效的方法。包膜糖蛋白B(Glycoprotein B,gB)和外被磷蛋白65(Phosphoprotein65,pp65)是目前研究最多的,也是被证明能分别产生较强的体液免疫和细胞免疫反应的两种靶蛋白。根据文献及生物信息学方法分析,pp65蛋白的490-508位氨基酸序列和gB蛋白的607-621位氨基酸序列具有较强的免疫原性,是HCMV的免疫优势表位。本研究分别选取pp65蛋白的490-508aa和gB蛋白的607-621aa的基因片段,人工合成编码基因;以合成编码基因序列作为模板,经PCR扩增后,连接表达载体pET-32a(+),转化BL21(DE3)plys菌株,表达成融合蛋白,通过Ni柱亲和层析法纯化目的蛋白,得率为30.5%。纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,分离血清,Western blotting法测抗体的特异性,结果显示抗体具有较好的特异性。间接ELISA法测得抗体的效价为1:102400,建立了HCMV间接ELISA检测方法。结果显示重组蛋白能诱导小鼠产生较强的体液免疫反应。用流式细胞仪测得免疫后小鼠外周血中CD4+T细胞和CD8+T细胞的数量分别是48.65%和16%,与对照组(38.05%和13.15%)相比,数量有显著提高(P<0.01);用双抗夹心ELISA法测得小鼠血清中IFN-γ,IL-2,IL-12的含量分别是2.39 pg/L,87.07ng/L,188.02 ng/L,与对照组(1.85 pg/L,52.95 ng/L,88.51 ng/L)相比,含量有显著提高(P<0.01)。因此重组蛋白能诱导小鼠产生较强的细胞免疫反应。综上所述,通过制备含有pp65蛋白和gB蛋白优势抗原表位基因的融合蛋白,可以使小鼠产生较强的体液免疫反应和细胞免疫反应;可作为HCMV亚单位疫苗,有效防治HCMV感染,为今后相关疫苗研究以及HCMV相关疾病的防治奠定基础。