【摘 要】
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目的:探讨TLR4基因RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒载体对人肝癌裸鼠移植瘤TLR4基因表达和移植瘤生长的影响。方法:1、构建1个阴性对照质粒和2个miR-TLR4质粒,选择干扰效果最明显的质粒
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目的:探讨TLR4基因RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒载体对人肝癌裸鼠移植瘤TLR4基因表达和移植瘤生长的影响。方法:1、构建1个阴性对照质粒和2个miR-TLR4质粒,选择干扰效果最明显的质粒进行慢病毒包装用于裸鼠移植瘤实验。2、建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,随机分成实验组、阴性对照组和空白对照组。隔天1次向各组动物移植瘤内分别注射TLR4miRNA慢病毒颗粒、携带无关序列的慢病毒颗粒或0.9%氯化钠溶液0.2ml,共5次,且注射前测量各组移植瘤体积的大小,并绘制裸鼠移植瘤生长曲线;11天后处死裸鼠,将瘤体称重并计算抑瘤率,并应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western bolt技术检测移植瘤中TLR4基因的表达。结果:Western bolt检测干扰效率显示,转染干扰片段1、2及阴性对照片段与对照组相比,转染干扰片段1后,TLR4蛋白表达量显著减少,即干扰片段1干扰效果最明显(P<0.05)。故将干扰片段1和阴性对照片段进行慢病毒包装。绘制裸鼠移植瘤生长曲线显示,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组移植瘤生长速度明显减慢(P<0.05);空白对照组和阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组和阴性对照组剥脱的瘤体瘤重分别为(2.32±0.03)g和(2.26±0.02)g,而实验组剥脱的瘤体瘤重为(0.95±0.02)g,实验组瘤体瘤重显著低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且瘤重抑瘤率达(58.12±0.35)%;而空白对照组和阴性对照组瘤体瘤重相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。并且实验组移植瘤组织TLR4mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论:TLR4miRNA慢病毒载体可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。
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