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目的:卒中已成为一个全球性的严重问题。柳叶刀神经学杂志发表的研究显示,1990年至2016年,卒中全球年龄标准化发病率下降了 8.1%,而我国却上升了 5.4%,居世界首位。2016年全球因卒中导致死亡人数达550万,其中我国死亡人数约197万,占1/3以上。在存活患者中,约有3/4不同程度地丧失劳动能力,重度致残者约占40%。我国急性脑卒中患者第1年复发率达17.7%,5年累积复发率在30%以上,且复发患者死亡率是未复发患者的2.67倍。由此可见,具有高发病率、高致残率、高复发率的卒中已成为我国社会发展的沉重负担,如何预防及改善临床疗效成为研究重点。卒中分为两大类,缺血性卒中(脑梗塞/脑梗死)及出血性卒中(脑出血),其中缺血性卒中占全部卒中的70%,防治意义重大。《中国脑梗死中西医结合诊治指南2017》推荐中西医综合治疗脑梗死,可提高脑梗死患者的临床疗效。而中医方药在急性期及恢复期的治疗,均以活血通络为主,采用活血化瘀类药物已被临床广泛应用。以三七类活血化瘀药为代表的血塞通可显著增加患者脑梗死后血清中血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)的含量,上调其表达。VEGF及VEGFR具有强大的促血管新生及神经保护作用,在脑梗死急性期可减小梗死灶,促进缺血半暗带脑血管的新生,从而挽救更多神经功能。但其上调VEGF表达的确切机制还有待进一步研究和探讨,这正是本课题研究和力求解决的问题。已知可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)是一种具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白,其在VEGF通路上没有信号转导功能,但可与VEGF高亲和力结合,从而抑制VEGF信号表达,发挥抗血管生成作用。本课题大胆假设VEGF信号表达的上调,与sFlt-1表达不活跃有关,实验将通过监测VEGF、VEGFR2及sFlt-1三者蛋白含量,来验证假设。方法:本课题主要内容分为两部分:循证部分和实验部分。循证部分对近10年联合血塞通对比单纯西药治疗脑梗死的临床疗效进行了 Meta分析。检索中国知网、万方数据、维普网、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase、the Cochrane Library、Clinical Trials共8个数据库,根据PICOS原则制定纳入标准。纳入文献的研究对象为脑梗塞患者,对照组接受阿司匹林、阿托伐他汀、依达拉奉的治疗,试验组在对照组基础上联合应用血塞通。结局指标为治疗前后NIHSS评分、基于NIHSS评分的疗效判定、血浆粘度、红细胞压积和不良事件情况。利用考科兰偏倚风险评估工具进行质量评价,采用RevMan 5.3软件进行数据处理。实验部分进行了体外实验,实验细胞选择小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),利用物理缺氧模型模拟脑梗死后缺血缺氧状态,细胞造模后给药最佳浓度的血塞通注射液,复氧一段时间后收集细胞裂解上清液,利用Western Blot方法检测上清液中VEGF、VEGFR2、sFlt-1三种蛋白的含量。实验设置正常组、造模组及实验组,分别检测三组细胞裂解上清液中的三种蛋白,利用Image J软件进行灰度分析、IBM SPSS 21软件进行实验数据的统计分析、GraphPad Prism 8进行作图。选择两独立样本t检验的统计学方法,比较三种蛋白两两组间的差异性,对结果进行讨论后得出结论。结果:Meta分析共纳入10篇文献,结果显示:试验组与对照组的治疗后NIHSS评分差异具有统计学意义,总体效应检验结果[MD=-2.52,95%CI(-2.76,-2.27),P<0.00001]。两组在疗效判定为基本痊愈、显著进步及无变化或恶化时的差异具有统计学意义。基本痊愈[OR=1.88,95%CI(1.40,2.53),P<0.0001],显著进步[OR=1.68,95%CI(1.30,2.17),P<0.0001].进步[OR=0.84,95%CI(0.63,1.10),P=0.21],无变化和恶化[OR=0.26,95%CI(0.18,0.37,P<0.00001)]。血浆粘度改变的情况结果为[MD=-0.55,95%CI(-0.66,-0.43),P<0.00001]。红细胞压积结果为[MD=-4.34,95%CI(-4.77,-3.91),P<0.00001]。不良事件的发生情况,两组间无统计学差异[OR=0.80,95%CI(0.45,1.44,P=0.47)]。实验研究发现:1.缺氧造模 6h 后,复氧 3h、6h、12h三个时间点造模组与对应时间点的正常组相比,细胞活力均有下降(P<0.05);随着复氧时间的延长,OD值呈上升趋势,细胞损伤得到改善。2.复氧3h、6h、12h时,不同浓度的血塞通注射液均对正常细胞有一定抑制作用(P<0.05)。3.复氧3h、6h、12h时,给药不同浓度血塞通的实验组均不能使细胞恢复至正常培养状态(P<0.05),但较相同复氧时间的造模组比,能提高细胞活力(P<0.05)。且当复氧时间为6h、血塞通给药浓度为100mg/L时,实验组与造模组的细胞活力百分比差值最大,可作为后续实验的条件。4.VEGF、VEGFR2的表达在造模组和实验组都较正常组升高(P<0.05),且实验组的升高较造模组更明显(P<0.05)。sFlt-1在造模组和实验组的表达较正常组升高(P<0.05),但实验组sFlt-1的表达较造模组少(P<0.05)。结论:循证方面,联合应用血塞通对比单纯西药治疗脑梗塞,更能够改善患者治疗后NIHSS评分,减轻了患者神经功能缺损程度,临床治疗效果更好,并且能降低治疗无效和病情恶化的可能性。在血液流变学方面,其能够降低血浆粘度和红细胞压积值,帮助纠正血液高粘状态,提高缺血区的血液供应。并无明显增加不良事件的风险,为临床提供了更优的治疗策略。实验方面,氧糖剥夺6h的缺氧造模后,随着复氧时间的延长,细胞活力逐渐恢复。实验药物血塞通注射液对正常细胞有轻度的抑制作用,但对缺氧损伤后的细胞有促进作用,虽不能达到正常细胞的活力状态,但好于造模组,以复氧时间6h且血塞通浓度100 mg/L时最显著。在分子水平上,实验药物血塞通注射液能促进细胞缺氧损伤后,反应VEGF通路情况的VEGF和VEGFR2两种蛋白的表达,其原因可能与实验药物减少了 VEGFR2的竞争蛋白——sFlt-1的表达有关,从而让VEGF通路的表达更活跃。了解到血塞通注射液对sFlt-1蛋白及VEGF通路的影响后,为拓宽其用药范围增加了可能性。随着后续相关实验的增多,发现不断深入,将血塞通注射液或三七总皂苷应用到与sFlt-1蛋白密切相关的如妊娠子痫前期或其他疾病当中,或许将成为可能。